基因重组技术生产胰岛素资料.ppt

* * 由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的急慢性乙型肝炎是一种严重的传染病，每年约有200万病人死亡，并有3亿人成为HBV携带者，其中相当一部分人可能转化为肝硬化或肝癌患者。目前对乙型肝炎病毒还没有一种有效的治疗药物，因此高纯度乙型疫苗的生产对预防病毒感染具有重大的社会效益，而利用重组酵母大规模生产乙型疫苗为其广泛应用提供了可靠的保证。 * 免疫原性（immunogenicity），是指能够刺激机体形成特异抗体或致敏淋巴细胞的能力。即指抗原能刺激特定的免疫细胞，使免疫细胞活化、增殖、分化，最终产生免疫效应物质抗体和致敏淋巴细胞的特性。 * S区的翻译产物为S多肽，由226个氨基酸残基组成；M多肽和L多肽（pre-S2-S和pre-S1-pre-S2-S)则分别由281个和389个氨基酸残基组成，Dane病毒颗粒除了含有大量的S多肽外，还有少量的M多肽和L多肽参与包装。 * 利用甲基营养菌巴斯德毕赤酵母作为受体细胞表达HBsAg，显示出比酿酒酵母系统更大的优越性。重组菌的构建过程如下：将HBsAgd 编码序列和用于选择标记的巴斯德毕赤酵母组氨醇脱氢酶基因PHIS4插入到甲醇可诱导型的AXO1启动子和AXO1终止子之间，构成环状重组质粒pBSAG151。用Bgl Ⅱ打开pBSAG151,使得AOX1启动子和AXO1终止子分别位于线型DNA片段的两端，并转化HIS ˉ的受体细胞。在HIS 的转化子中，重组DNA片段与受体染色体上的AOX1基因发生同源交换，单拷贝的HBsAg编码序列稳定地整合在染色体上。由于巴斯德毕赤酿酒酵母染色体DNA上还拥有表达水平较低的第二个乙醇氧化酶基因AOX2，因此转化子仍能在含有甲醇的培养基上生长。重组菌现在含有一定浓度的甘油培养基中培养，待甘油耗尽时，加入甲醇诱导HBsAg的表达，最终S蛋白的产量可达到受体细胞可溶性蛋白总量的2% ~3%，比含有多拷贝表达单元的重组酿酒酵母要高近一倍。 * * * 长期的植物生理学研究结果表明，植物对盐、碱、旱、寒、热等环境不利因素的自我调节能力很大程度上取决于细胞内的渗透压，提高渗透压往往能改善植物对上述环境不利因素的耐性。为达到此目的至少有两种战略可供选择：一是高效表达能提高植物胞内渗透压的同源或异源蛋白；二是借助于蛋白质工程技术改变植物细胞内丰度较高的蛋白质的氨基酸组成，如在不影响蛋白质结构与功能的前提下适当提高脯氨酸残基的含量等。 * 花卉的颜色是由花冠中的色素成分决定的。大多数花卉的色素为黄酮类物质，由苯丙氨酸通过一系列的酶促反应合成，而颜色主要取决于色素分子侧链取代基团的性质和结构，如花青素衍生物呈红色，翠雀素衍生物呈蓝色等。在黄酮类色素的生物合成途径中，苯基苯乙烯酮合成酶（CHS）是一个关键酶。利用反义RNA技术可有效抑制矮牵牛花属植物细胞内的CHS基因表达，使转基因植物花冠的颜色由野生型的紫红色变成了白色，并且对CHS基因表达抑制程度的差异还可产生一系列中间类型的花色。 * * 在许多植物的种子中，磷元素主要是以肌醇-6-磷酸（即植酸）的形式存在。单胃动物如猪和家禽几乎不能利用这些磷元素，因此必须在饲料中添加无机磷以满足动物营养的需要。在饲料中添加植酸酶则可以提高动物对植酸磷元素的利用率，减少动物粪便中磷酸盐含量，改善畜牧业发达地区磷酸盐富集化污染的程度。荷兰科学家从黑曲霉菌中克隆到植酸酶基因，并将之导入到烟草的种子中表达。在饲料中添加这种转基因烟草的种子便可达到良好的效果。 * * * 4. 广泛用于外源基因表达的酵母宿主菌 酵母属 如酿酒酵母 克鲁维酵母属 如乳酸克鲁维酵母 毕赤酵母属 如巴斯德毕赤酵母 裂殖酵母属 如非洲酒裂殖酵母 汉逊酵母属 如多态汉逊酵母 其中酿酒酵母的遗传学和分子生物学研究最为详尽，　　　　 但巴斯德毕赤酵母表达外源基因最理想。 5. 利用重组酵母生产乙肝疫苗 （1）乙型肝炎病毒的结构 　　蛋白包裹的双链DNA病毒，具有感染力的病毒颗粒呈球面状，直径为42 nm，基因组仅为3.2 kb。病毒颗粒的主要结构蛋白是病毒的表面抗原多肽（HBsAg）或S多肽。颗粒内的蛋白成份包括核心抗原（ HBcAg ）、病毒DNA聚合酶、微量病毒蛋白。 （1）乙型肝炎病毒的结构 　　除此之外，被乙肝病毒感染的人的肝脏还能合成并释放大量的22nm的空壳亚病毒颗粒，其免疫原性是未装配的各种包装蛋白组份的1000倍。包装蛋白共有三种转膜糖蛋白：S、M、L多肽。 5. 利用重组酵母生产乙肝疫苗 （2）乙型肝炎病毒的包装蛋白编码基因 5. 利用重组酵母生产乙肝疫苗 乙肝病毒在体外细胞培养基中并不能繁殖，因此第一代的乙肝疫苗是从病毒携