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* Data results with Q-Prep/Quick Spin: PerCP and APC demonstrate significantly lower MFI than ECD, PC5, and PE. * Fluorescence Spectrum Viewer FITC和EGFP能否一起使用 荧光染料比较(平均荧光强度) Q-Prep / ImmunoPrep 试剂系统 PerCP APC FITC ECD PC5 PE CD8-FITC CD8-PE CD8-ECD CD8-PC5 CD8-PerCP CD8-APC PerCP APC FITC ECD PC7 PC5 PE CD8-FITC CD8-PerCP CD8-APC CD8-PC5 CD8-ECD CD8-PE Dye Intensity Comparisons Data generated on EPICS Altra on a single donor PC7 Dye Performance CD8-PC7 (FC500 or FACSCalibur) CD8-PC7 (XL) XL-单激光四色的荧光光谱示意图 FC500-单激光五色的荧光光谱示意图 常用的核酸荧光标记探针 PI(碘化丙啶):可嵌入核酸(DNA、RNA)的双螺旋碱基对中,主要用于对DNA染色,使用时需用RNase对细胞进行处理;不能透过活细胞膜对核酸染色,可用于鉴别活死细胞,对活细胞染色时需对细胞膜打孔,以便染料透过。488nm激光激发,发射光谱宽泛550-725nm,在贝克曼的流式细胞仪上使用ECD荧光素通道。 TO(噻唑橙):可用于对网织红细胞中的RNA进行检测定量分析,TO的荧光强度与RNA含量由良好的线性关系,对细胞膜的通透性好,可直接对活细胞染色,488nm激发,可发射出530nm荧光,使用FITC荧光素通道。 常用荧光素激发、发射、滤光片波长 Qdots-纳米微晶体:未来的荧光素 同一种光源激发一种晶体发射多种荧光 Qdots 605的激发波长和发射波长(VERY SHARP) 常用荧光染料组合 FITC+PE:最常用的双色组合 FITC+PE+PE-Cy5:最常用的三色组合,进行多色荧光染色时荧光光谱重叠补偿很小 FITC+PE+PerCP+APC:BD最常用的四色组合 FITC+PE+ECD+PE-Cy5:贝克曼库尔特公司最常用的四色组合 FITC+PE+ECD+PE-Cy5+PE-Cy7:贝克曼贝克曼库尔特公司最常用的五色组合,而且PE-Cy7与FITC、PE、PE-Cy5标记的抗体一同使用时的荧光补偿小 PE-Cy5可与FITC、PE同时使用,但不能与APC同时使用,二者之间荧光干扰太大 BD/BC公司常用的荧光染料 488nm激光激发的荧光染料 FITC(BD) FITC(BC) PE (BD) PE(BC) PerCP(BD) PE-Cy5(PC5)(BC) PE-Cy7(PC7)(BD) PE-Cy7(PC7)(BC) ECD(BC) 633nm激光激发的荧光染料 APC(BD) APC(BC) APC-Cy7(BD) BD/BC公司不同仪器能使用的荧光染料 BD Calibur (488nm+633nm双激光) FITC / PE / PerCP(或者PE-Cy5 ,或者PE-Cy7) / APC BD Canto II (488nm激光/633nm激光/407nm激光) FITC / PE / PerCP / PE-Cy7 / APC / APC-Cy7 / Pacific Blue BC XL (488nm激光) FITC / PE / ECD / PE-Cy5 FITC / PE / PE-Cy5 / PE-Cy7 BC FC500 (488nm单激光) FITC / PE / ECD / PE-Cy5 / PE-Cy7 BC FC500 (488nm+ 633nm双激光) FITC / PE / ECD / APC / PE-Cy7 流式抗体的选择搭配及对照的设定 CD分子 CD(cluster of differentiation)分子 目前已不仅仅专指白细胞分化抗原,还有红细
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