11级四次分生作业(蓝色11年考题)技术方案.docVIP

《分子生物学》作业第2-4章/第8章 什么是SNP？试述研究SNP的意义。 　全称Single Nucleotide Polymorphisms，是指在基因组上单个的变异。是人类可遗传变异中最常见的一种SNP自身的特性决定了它更适合于对复杂性状与疾病的遗传解剖以及基于群体的基因识别等方面的研究： 1）、 SNP数量多，分布广泛。 2）、 SNP适于快速、规模化筛查。 3）、 SNP等位基因频率的容易估计。　　 4）、 易于基因分型。SNPs 的二态性，也有利于对其进行基因分型。 位、克隆和鉴定。寻找疾病相关的突变位点，发展疾病预防策略研究SNP本身对机体的影响，尤其是疾病的易感性个性化医疗。通过对药物靶点个体差异性分析，个性化药物、方法治疗。 法医学研究。 器官移植中供体/受体配对分析。 ORF ? 开放阅读框架 (open reading frame，ORF)：在DNA链上，由蛋白质合成的起始密码开始，到终止密码为止的一个连续编码序列。 调节基因 ? 请介绍目前蛋白质组学研究中最常用的基本技术流程并简述其原理。 ?蛋白质组学常用的研究方法有双向凝胶电泳和质谱技术，基于凝胶的工作流程是目前使用的较为广泛的、发展最为成熟的工作流程。 简述酵母双杂交技术的原理。 分子克隆技术包括哪些基本步骤？目的基因和载体连接主要有哪些方法？基本步骤 二、载体的选择 三、目的基因和载体的酶切与连接 四、重组DNA导入受体细胞 五、重组体的筛选和鉴定 目的基因和载体连接主要有DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；本法适用于在质粒和目的基因上有相同单或双酶切位点； (二) 平末端连接，质粒和目的基因上没有相同单或双酶切位点，人工接头，通过同聚尾连接；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）DNA连接酶将它们连接起来； （三）先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。 这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。 简述分子克隆中常用的工具酶及其作用。(磷酸基团与3(羟基形成3’,5’磷酸二酯键，将具有相同粘性末端或平末端的两条双链DNA片段连接起来，实现DNA的体外重组。 碱性磷酸酶：作用是催化除去DNA、RNA或dNTP上的5-磷酸基团，其主要用途有(出去DNA片段上的5磷酸，以防自身连接。(在使用T4多核苷酸激酶和32P同位素标记前出去RNA或DNA上端的5磷酸。 核酸酶S1:可水解双链DNA、RNA或DNA-RNA杂交分子中的单链部分，其作用是出去双链DNA的粘性末端以产生平末端、出去cDNA合成时形成的发夹结构以及分析RNA的颈环结构和DNA-RNA分子的杂交情况等。 举例说明载体应具备的基本要素以及双抗生素筛选和蓝白斑筛选的原理。 ① 能自我复制并具有较高的拷贝数，并有适宜的相对分子量，一般应10kb; ②带有遗传筛选标记； ③有适当的限制酶切位点，便于外源基因的插入和筛选。 （2）双抗生素筛选原理： 某些质粒载体如 pBR322质粒中装有Ampr和Tetr 抗性基因，在含四环素和氨苄青霉素的平皿上都能够生长的细菌只含有空载体，此筛选方法称为双抗生素对照筛选。 (3)Blue/white screen: 蓝白斑筛选。即β-半乳糖苷酶基因失活筛选。其原理是：某些质粒载体带有大肠杆菌乳糖操纵子的lacZ’基因，该基因含一段编码β-半乳糖苷酶氨基末端145个氨基酸α－肽的DNA片断，IPTG可诱导此片断合成，此片断能与宿主细胞所编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内α－互补，形成完整的β－半乳糖苷酶。该酶能催化指使剂底物X－gal形成蓝色菌落。当外源基因插入lacZ’基因中MCS(多克隆位点)，lacα－肽基因阅读框架被破坏，细菌内将无β－半乳糖苷酶活性，结果重组克隆呈白色菌落。 有哪些常用的探针标记物？如何进行探针的标记？ 放射性同位素标记常用标记探针的同位素 32P：β，半衰期短（14.3d），标记核苷三磷酸，灵敏度很高，分辨率不高。 35S： β，标记蛋氨酸或取代核苷酸α位磷酸基中的氧，灵敏度高，分辨率较核酸序列测定和原位杂交。 3H： β，半衰期长（4417d），使用较少。 125I：γ，分辨率高，操作简单，安全防护要求较高，原位杂交。 同位素标记方法 1.缺口平移法（双链） 2．随机引物法 （单链） DNA探针的末端标记 4．PCR标记DNA探针非放射性标记 酶标记核酸探针2）．生物素（biotin）标记核酸探针应用广泛，可替代同位素标记。用链亲和素系统检测。 酶促标记法操作复杂，价格昂贵。光敏生物素（photobiotin）标