动物细胞融合与单克隆抗体解读.ppt

材料: 1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？ 灭活病毒诱导细胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。 动物细胞融合 3、单克隆抗体的应用 5. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （ ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞　 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B.①③⑤　　 C.①②③④ 　 D.②③ * * 本节聚焦 1.了解动物细胞融合的原理、过程和意义; 2.理解单克隆抗体制备的过程和应用。 动物细胞融合与单克隆抗体 植物细胞A 植物细胞B 去掉细胞壁 去掉细胞壁 原生质体A 原生质体B 原生质体融合 杂合的原生质体 再生出细胞壁 杂种细胞 细胞分裂 分化发育 愈伤组织 杂种植株 温故知新: 植物体细胞杂交过程 人-鼠(想像图) 一、动物细胞融合 1.概念： 动物细胞融合（cell fusion）也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。 2、原理： 细胞膜的流动性 为什么灭活的 病毒能作诱剂？ 3.融合过程： P52生物技术资料卡 诱导方法： 物理方法： 化学法： 生物法： 灭活的病毒 电激等 聚乙二醇（PEG) 4.意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 5.应用： 最重要的用途是 制备单克隆抗体 物理法： 化学法： 生物法： 诱导融合的方法 原理： 细胞膜的流动性 过程： 离心、震动、电激 聚乙二醇（PEG) 灭活的病毒 动、植物细胞融合的主要区别 用途： 最重要的用途是 制备单克隆抗体 植物细胞杂交与动物细胞融合的比较 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 主要用途 诱导方法 使用的酶 融合前处理 原理 细胞膜的流动性细胞的全能性 细胞膜的流动性 纤维素酶、果胶酶 胰蛋白酶 物理方法 （离心、振荡、电激） 化学方法（PEG） 物理、化学方法 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 思考 ？ 1. 抗体由何种细胞产生？如何产生？ 2. 抗体的化学本质是什么？ 与抗原作用的特点？ 主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体？ 思考 ？ 1. 抗体由何种细胞产生？如何产生？ 2. 抗体的化学本质是什么？ 与抗原作用的特点？ 主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体？ 抗体的传统生产方法 从血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 多种效应B细胞 动物体内 多种抗体 抗原 单克隆抗体的制备 单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体 利用效应B细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 设计方案： 1、单克隆抗体的过程 注射抗原 已免疫的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 骨髓瘤细胞 免疫小鼠 单克隆抗体 筛选 克隆、筛选 体内培养 体外培养 B淋巴细胞 （选择培养基） （抗体检测） 细胞融合 杂交细胞 1、（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？ 2、本过程中进行了两次筛选，目的分别是什 么？第1次筛选要淘汰哪些细胞？ 3、杂交瘤细胞有何特点？ 4、本过程利用的哪些技术？ 思考以下问题： 2、单克隆抗体的优点 特异性强、灵敏度高 （1）作为诊断试剂——最广泛应用 准确、高效、简易、快速 （如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等） （2）运载药物 生物导弹=单克隆抗体+药物(治疗肿瘤） (“生物导弹” —单抗作导向，药物为弹头) 看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字