免疫学检测技术ok解读.ppt

（一）凝集反应（agglutination） 颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。 （二）沉淀反应（precipitation） 1、单向免疫扩散（single immunodiffusion）：常用于测定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。 酶：辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶 临床应用 T、B细胞及其亚群的鉴定 血清中自身抗体的检测 组织中Ig及补体组分的检测 肿瘤抗原的检定 细菌和病毒的快速检定 特异的组织固定抗体检测 2.酶免疫分析(enzyme immunoassay，EIA) 9）酶联免疫斑点试验 第二节 免疫分子的常用检测方法 血清免疫球蛋白的定量测定（IgG、IgM、IgA） 单向免疫扩散、免疫比浊法 第四节 免疫学检测方法的应用 评估与选择 特异性（specificity） 敏感性（sensitivity） 特异性（specificity） 用该试验检查非患者时出现阴性结果的可能性。 敏感性（sensitivity） 用该试验检查某病患者时出现阳性结果的可能性。 特异性=真阴性/（真阴性+假阳性）×100% 敏感性=真阳性/（真阳性+假阴性）×100% 表 免疫学测定方法敏感性比较 临床应用 感染性疾病 免疫缺陷病 免疫学监测 ①51Cr释放法 ②凋亡细胞检查法：TUNEL法（TdT dependent dUTP-biotin nick end labeling）、FACS测定法 （2）淋巴细胞介导的细胞毒试验（LMC） 检测CTL、NK、 LAK、TIL杀伤靶细胞功能 放射性测定 细胞毒试验原理示意细 靶细胞 效应细胞 分离上清 （3）细胞因子检测： 鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测 ①ELISA法 ②生物活性测定法 ③聚合酶链反应（PCR）法 （2）抗体形成细胞测定—— 溶血空斑试验 （hemolytic forming cell assay，HFC）计算HFU/ml （二）B细胞功能测定 （1）B细胞增殖试验：LPS、SPA刺激，检查抗体形成细胞的数目 （3）ELISPOT法检查特异抗体形成细胞 测定方法 敏感性（每升） 单向免疫扩散试验 ＜1～2mg 双向免疫扩散试验 ＜1mg 火箭电泳 ＜0.5mg 对流电泳 ＜0.1mg 免疫电泳 ＜5～10mg 凝集试验 1μg 被动血凝试验 1μg 血凝抑制试验 0.1μg 补体结合试验 0.1μg 放射免疫分析法 ＜1pg 酶联免疫吸附试验 ＜1ng 定量免疫荧光分析 ＜1pg * * 免疫学诊断 第一节 抗原或抗体的检测 抗原抗体反应的原理 物质基础：抗原的抗原决定基与抗体的抗原结合部位之间的结构互补性。 两者相互结合，在适宜条件下，出现可见反应。 一、抗原抗体反应的特点及其影响因素 1、特异性 2、可见性（比例适合） 3、可逆性 1.特异性 抗原A 抗原C 抗原B 特异性反应 交叉反应 无反应 2、抗原抗体反应的可见性 抗原抗体按适当比例结合，形成肉眼可见的现象 适合比例性 抗体含量 抗原含量 前带 后带 等价带 网格学说（lattice theory） 抗体过剩 抗原过剩 抗体抗体比例合适 3.可逆性 亲和力（affimity）与亲合力（avidity） ——抗体抗原之间的结合力大小。 结合力大则亲和力强 ，不易解离，反之则然。 K（亲和常数）= Ag+Ab Ag Ab 应 用 1、利用已知抗原检测未知抗体 （1）检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病： 伤寒病、流行性乙型脑炎、AIDS病等。 （2）检测自身抗体——诊断自身免疫病：SLE、类风湿性关节炎等 2、利用已知抗体检测未知抗原 （1）鉴定病原菌：诊断疾病 （2）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌 （3）检测血型抗原、HLA抗原：鉴定血型，亲子鉴定 （4）检测药物半抗原： 确认运动员是否服用兴奋剂 二、 抗原或抗体的检测方法 凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术 1 、直接凝集(direct agglutination) 玻片凝集、试管凝集 2、间接凝集（indirect agglutination） 3、抗球蛋白试验（Coom