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基因治疗 Gene therapy 传统疗法与基因治疗 传统治疗方法 药物治疗 手术治疗 放射治疗 理疗 新的生物治疗： 基因治疗 (gene therapy) Gene Therapy 什么是基因治疗？ 怎样进行基因治疗 ? 基因治疗存在哪些问题? 基因治疗的概念： 经典概念：将具有正常功能的基因置换或增补患者体内缺陷的基因，从而达到治疗疾病的目的。 广义概念：将某种遗传物质转移至患者体内，使其在体内表达，最终达到治疗疾病的目的，均称之为基因治疗。 1、遗传病（Inherited disorders）：ADA缺陷的严重联合免疫缺陷症（SCID）,血友病，家族性高胆固醇血症，囊性纤维变性，Gaucher症等 2、恶性肿瘤：恶性黑色素瘤，成神经细胞瘤，白血病，肾癌，卵巢癌等 3、感染性疾病（Infectious diseases）：艾滋病 4、其它：血管病,etc 基因治疗的必要条件 发病机制在DNA水平上已经清楚 要转移的基因已经克隆分离，其表达产物有详尽的了解 该基因正常表达的组织可在体外进行遗传操作 治疗什么病？增强而非治疗将被否定 目前还有什么其它疗法？ 治疗的安全性如何？个人、家人、环境 对该患者的疗效如何？ 公正的选择受治疗的患者？ 知情同意原则 保护患者的隐私权 Martin Cline 事件 M.Cline是加州大学洛杉矶分校的血液学科主任 1980年企图用基因疗法来治疗两名重型地中海型贫血的欧洲病人。试图将正常珠蛋白基因插入患者骨髓的祖细胞中，以改善贫血和反复输血导致的铁超负荷 因为使用重组的珠蛋白基因，没有按照规定的天然的珠蛋白基因，被加州大学的（human subjects protection committee)终止该项工作，并被NIH终止其获得的两项科研基金。 基因治疗的几种策略 原位修复有缺陷的基因，使其在质和量上均能得到正常表达 基因替代疗法，即传统上的基因治疗 重新开放已关闭的基因，目的在于促使有类似功能的基因表达 基因抑制，导入外源基因以抑制原有的基因，目的在于阻断有害基因的表达 基因封闭，主要是指反义RNA，并被誉为“基因封条” 引入特定基因以提高免疫力，向TIL细胞导入TNF、IL-2、干扰素等 基因治疗的内容 治疗基因的选择： 缺陷对应基因；治疗意义基因 靶细胞的选择： 生殖细胞；体细胞（淋巴细胞、骨髓细胞等） 治疗基因导入靶细胞的载体： 病毒载体；非病毒载体 导入基因的方式： ex vivo　；in vivo 基因治疗的方案： 基因矫正或置换；基因增补；基因灭活；导入非特异性基因 基 本 步 骤 治疗性基因的选择 基因载体的选择 靶细胞的选择 基因转移 治疗基因在靶细胞中的正确表达 回输体内 （一）.治疗性基因的选择 在体内仅有少量的表达就可显著改善症状； 该基因的过高表达不会对机体造成危害； 在抗病毒和病原体的基因治疗中，选择的靶基因应在病毒和病原体的生活史中起重要的作用，并且该序列是特异的. 肿瘤病人多有免疫缺陷，可选用免疫因子基因转入人体；可采用反义技术封闭细胞内活化的癌基因或向细胞内转入野生型抑癌基因，抑制肿瘤生长，所针对的癌基因或抑癌基因应与该肿瘤的发生和发展有明确的相关性。 （二）.载体的选择 理想的基因转移载体条件： ①高转移频率； ②容量大； ③高滴度； ④外源基因稳定表达； ⑤靶向性； ⑥安全性高 载体的种类 病毒载体：逆转录病毒（RV）、腺病毒（AV)、腺相关的病毒(AAV)、疱疹病毒和肝炎病毒等。 非病毒载体：这类载体的发展较快，目前主要是脂质体( liposome ) 。 几种常用的病毒载体 逆转录病毒载体 8.5 kb 腺病毒载体 36 kb 腺相关病毒载体 5 kb 逆转录病毒载体的缺点 要求靶细胞DNA合成很活跃，因为病毒的感染和插入作用均依赖于靶细胞DNA的复制 靶细胞表面需要有特殊的受体 必须应用带有缺陷逆转录病毒基因组的细胞（包装细胞） 滴度低 整合入宿主为随机性，有致突变可能 腺病毒载体（AV） 腺病毒最早是从腺样组织分离出来。其对淋巴腺有亲和力，可以在淋巴腺中潜伏很久。可以侵入呼吸道、肠道、结膜，在呼吸道中可以引起呼吸道的各种发炎 腺病毒载体为无包膜的双链DNA病毒，基因组为36kb，了解清楚。4型与7型应用多年，证实对人体无害 AV有较大的宿主范围，可以感染非分裂细胞，在in vivo的基因转移上优势较大 AV感染细胞时其DNA不整合到宿主的染色体上，无潜在的致癌危险 腺病毒载体的优缺点 优点： 滴度高 可插入8kb的源DNA片段 可用于体内基因直接转移 缺点： 不能整合，只能瞬时表达，遗传病不能应用 在体内存在复制的可能性，安全性值得注意 腺相关病毒（AAV） 是目前已知的动物病