肿瘤个体化分子病理检测和临床应用资料.pptVIP

肿瘤个体化分子病理检测以及临床应用 山东省医学科学院附属医院病理科 杨香山 肿瘤个体化分子病理检测及临床应用 一、开展肿瘤个体化分子病理检测的意义 二、分子病理检测的标本选择 三、分子病理检测的方法 四、分子病理检测的项目 三.分子病理检测的方法 基因试剂盒 价格适中、灵敏度，特异性高、所需时间短。PCR通用设备平台 基因芯片 特定设备，价格高 测序法检测 PCR通用设备平台，灵敏度，特异性低、所需时间长。价格便宜 （一）技术简介 肿瘤个体化治疗是指实施治疗前根据患者的个体差异（基因差异），“量体裁衣”（基因检测）地制定某个患者的治疗方案，即检查某种靶向药物对患者是否有效或是在多种化疗药物中筛选最有效的药物。化疗个体化可显著提高治疗效果，有效缓解疾病，避免药物的毒副作用，提高患者的生活质量，避免因反复尝试不同药物带来的身体损害、错过最佳治疗时间以及浪费金钱。使用靶向药物前必须基因检测，从而判断该药是否适用该患者。 荧光定量PCR与基因测序法检测基因突变的比较 荧光定量PCR与基因测序法检测基因突变的比较 基因检测过程示意图 标本采集与运输要求 四.分子病理检测的项目 分子靶向治疗基因检测： ●药物敏感基因检测： □ERCC1基因表达 EGFR（29种、4种） □P53基因突变（6种突变） KRAS（7种突变） □BRCA1基因表达 BRAF基因突变（V600E突变） □RRM1基因表达 Jak2基因突变（V617F突变） □TYMS基因表达 PIK3CA基因突变（5种热点突变） □DPD基因表达 C-KIT基因突变（D816V突变 ） □STMN1基因表达 RET基因突变（M918T突变） □TYMP基因表达 PDGFRA基因突变 （D842V突变） □BRCA1基因表达 BCR-ABL基因突变（T315I突变） □TOP2A基因表达 EML4-ALK融合基因（RT-PCR法) □TUBB3基因表达 （一）分子靶向药物作用靶点基因检测临床应用 （二）化疗药物对应的基因检测项目临床应用 扩增阻碍突变系统(Amplification refractory mutation system，ARMS) 又称等位基因特异性扩增（Allele-specific amplification，ASA）。利用PCR引物的3’端末位碱基必须与其模板DNA互补才能有效扩增的原理，设计等位基因特异性 PCR扩增引物，在严格的条件下，只有在引物3’碱基与模板配对时才能出现PCR扩增带，从而检测出突变。该法省去了探针杂交操作，通过设计两个5’端引物，一个与正常DNA互补，一个与突变DNA互补，对于纯和性突变，分别加入两种引物及3’端引物进行两个平行的PCR，结合有与突变DNA完全互补的引物才可以延伸并得到PCR扩增产物。 细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩， 染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂， 形成50~300kbp长的DNA大片段， 或180~200bp整数倍的寡核苷酸片段， 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱（DNA ladder）。细胞经处理后，采用常规方法分离提纯DNA,进行琼脂糖凝胶和溴化乙啶染色，在凋亡细胞群中可观察到典型的DNA ladder.如果细胞量很