乙型肝炎病毒小鼠动物模型构建应用研究现状论文.docVIP

乙型肝炎病毒小鼠动物模型构建的研究现状 摘要：人乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染具有明显的种属特异性，HBV的易感宿主只局限于人及黑猩猩等灵长类动物。因此，建立适合于HBV研究简单、易得的小动物模型一直是研究者追求的目标。由于当代病毒学、分子生物学及免疫学等相关学科的发展，极大地推动了HBV感染动物模型的研究。本文就近年来有关HBV及其它嗜肝病毒感染的小鼠动物模型的造模方法作一综述。 关键词：乙型肝炎病毒；小鼠；动物模型 乙型病毒性肝炎病毒（Human Hepatitis B Virus, HHBV）是目前所知的最小的嗜肝病毒[1]，其DNA为部分双链环状，约3.2kb。人类经过大半个世纪的临床与基础研究，对乙型病毒性肝炎疾病有了一定的认识：乙型肝炎病毒侵入人的肝细胞，但并没有破坏后者，只有在人体的免疫系统攻击病毒的同时才损伤肝细胞以致产生肝炎；病毒的不断复制伴随着免疫系统的不断攻击，被破坏的肝细胞数目的不断增加并超过肝脏的修复能力，使肝脏出现坏死病灶，坏死病灶纤维化，最终导致肝硬化；肝细胞的慢性进行性损伤、炎症、再生性增生、转录调节失控并整体性变异、最后形成肝细胞癌。 目前，4亿人为HBV持续感染，每年因肝功能衰竭和HBV相关肝癌死亡的病例超过100万[2]。我国是乙型肝炎的“重灾区”，据统计我国乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性者有1.2亿人以上，而由乙型肝炎引起的肝功能异常患者有3000万人，严重威胁着人民的健康。由于HBV是一种种属特异性和组织特异性极强的DNA病毒，只感染人和高等灵长类动物，不感染医学中常用的哺乳类实验动物，HBV感染的动物模型是目前研究的主要方向。随着转基因技术的发展与成熟，HBV 转基因小鼠模型成功建立，HBV的生物学特性、病毒-宿主相互作用、病毒致病机制和开发防治HBV的疫苗和药物等方面的问题提供了良好的实验动物型，HBV感染的小鼠动物模型的建立方法做一简要综述。 1 HBV急、慢性感染小鼠模型的建立 1.1 HBV急性感染小鼠模型的建立 最近几年国内外有学者利用流体动力学的方法建立HBV急性感染小鼠模型的报道。孟忠吉等[3]采用高压水注射方法，HBV质粒导入BABL/cJ小鼠体内，HBV基因可以在小鼠体内表达和复制，，HBV清除过程与人类的HBV急性感染类似。。汪光蓉等[4]人通过尾静脉快速、高负荷注射含1.5倍的HBV真核表达质粒(pHBVl.5)。注射后第6天，MEIA检测血清HBsAg、HBeAg的水平；RT-PCR检测肝组织HBV prec/c mRNA转录的水平。同时设立pcDNA3.1正常对照组和PBS空白对照组。结果pHBVl.5注射组小鼠血清HBsAg、HBeAg为阳性，且肝组织表达HBeAg；而pcDNA3.1和PBS对照组未能检测到HBsAg、HBeAg的表达，成功地建立了急性HBV感染的BALB/E小鼠动物模型，在一定程度上克服了由于HBV宿主范围极窄给人们研究带来的极大限制。刘霜等[5]人选择中国地区高流行的人HBVC基因型具有复制能力的1.2倍HBV基因组为材料，HBV基因组的重组腺病毒相关病毒载体pZAC2.12HBV。利用尾静脉水动力注射法将pZAC2. 12HBV注入小鼠。结果瞬间转染人肝癌细胞系HepG2细胞后，HBsAg。ELISA方法检测小鼠血清中HBsAg和HBeAg的水平可持续表达14天，2HBs、抗2HBe出现。同时在14天之内可检测到血清中HBV2DNA 特异片段，成功建立HBV感染急性小鼠模型。 近几年有国内学者通过HBV转基因小鼠经体液免疫诱导后建立急性肝炎动物模型的报道。胡卫江等[6]采用尾静脉注射方法将3种HBV单克隆抗体HBsAb、HBeAb、HBcAb 分别或混合导入整合有HBV全基因组的转基因小鼠体内，，3种单克隆抗体单独或混合处理均引起HBV转基因小鼠肝细胞的病理学损伤，HBsAb及HBsAb+HBcAb混合处理组损伤较为严重；但小鼠血清转氨酶基本表现正常。表明体液免疫反应可以诱导HBV转基因小鼠组织细胞发生损伤，HB2sAb及HBsAb+HBcAb处理的HBV转基因小鼠可以作为研究急性肝炎发生机制的动物模型。 1.2 HBV慢性感染小鼠模型的建立 覃小敏等[7]采用纯化的3型鼠肝炎病毒(MHV-3)经腹腔注入近交系C3H/HeJ小鼠体内，MHV-3后，63%存活，，，ALT、AST升高而TP、ALB有所下降，，，，，，， 嵌合小鼠肝脏模型就是把正常人的肝细胞移植到免疫缺陷的小鼠体内产生免疫耐受，建立人鼠嵌合肝脏，然后用高滴度的HBV阳性血清感染小鼠，建立HBV感染的人鼠嵌合肝脏小鼠模型，在肝脏和外周血清中均可以发现HBV感染的检测指标。HBV在嵌合肝脏中可以复制，可以模拟HBV复制的全过程；可以用来