2013-基因一级结构资料分析.pptVIP

下载本文档

5
0
约 22页
2016-11-12 发布于湖北
举报
版权申诉

2013-基因一级结构资料分析.ppt

1、本文档共22页，可阅读全部内容。
2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

Thank you 目录目录基因一级结构解析技术人类的多种疾病都与基因的结构或功能异常有关，因此，要阐明疾病发生的分子机制和进行有效的诊断与防治，均需首先揭示基因的结构与功能。基因的一级结构是指脱氧核苷酸的排列顺序，解析一级结构最精确的技术就是DNA测序（DNA sequencing）。一、双脱氧法和化学降解法 Sanger双脱氧测序（dideoxy sequencing）法 Maxam-Gilbert化学降解测序法化学反应可设有4组独立的反应：G反应（在G 残基上的裂解）、A+G反应（在嘌呤残基上的裂解）、C+T反应（在嘧啶残基上的裂解）、C反应（在C残基上的裂解）。二、全自动荧光DNA测序技术 1. 单色荧光法：采用单一荧光染料标记引物5′-端或dNTP，所有产物的5′-末端均带上了同一种荧光标记，一个样品的四个反应必须分别进行，相应产物也必须在四个不同的泳道内电泳 2. 四色荧光法：采用四种不同的荧光染料标记同一引物或4种不同的终止底物ddNTP，最终结果均相当于赋予DNA片段4种不同的颜色。因此，一个样品的4个反应产物可在同一个泳道内电泳。三、焦磷酸测序焦磷酸测序是一种基于聚合原理的DNA测序（确定DNA中核苷酸的顺序）方法。它与桑格法（Sanger）不同，依赖于核苷酸掺入中焦磷酸盐的释放，而非双脱氧核苷三磷酸参与的链终止反应。该技术是由波尔·尼伦和穆斯塔法·罗纳吉于1996年在斯德哥尔摩的皇家工学院发展出来的。焦磷酸测序技术操作简单，结果准确可靠。该方法的测序长度一般短于Sanger法。四、循环芯片测序 ① 可实现大规模并行化分析 ② 不需电泳，设备易于微型化 ③ 样本和试剂的消耗量降低，降低了测序成本技术平台：454测序、Solexa测序(Illumina测序)、 SOLiD测序等。基本流程： ① 将基因组DNA随机切割成为小片段DNA； ② 在所获小片段DNA分子的末端连上接头，然后变性得到单链模板文库； ③ 将带接头的单链小片段DNA文库固定于固体表面； ④ 对固定片段进行克隆扩增，制备芯片。 ⑤ 针对芯片上的DNA，利用聚合酶或连接酶进行一系列循环反应，通过读取碱基连接到DNA链过程中释放出的光学信号而间接确定碱基序列。五、单分子测序技术单分子实时技术（single molecule real time technology，SMRT）: 通过掺入并检测荧光标记的核苷酸，来实现单分子测序目录目录