传染病学实习报告.doc

实习报告 学 院: 动物医学院 课 程: 传染病学教学实习 班 级: 动医63班 学 号: 1716320 姓 名: 孟刚 指导教师: 曹瑞兵 职称: 副教授 实习时间 2009年5月23日至2009年5月29日 实习地点 逸夫楼4017 2010年6月7日 南京农业大学教务处制 实习报告 1 实习目的：通过对细菌性和病毒性传染病的模拟发病，以掌握家畜传染病的基本临床过程和实验室诊断的基本策略和方法。 2 实习材料 2.1 试验动物：4周龄雏鸡、9-10日龄鸡胚。 2.2 试剂与器材：氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、蛋白胨、酵母提取物、伊红美蓝、麦康凯、革兰氏染色液、香柏油、甲醇、药敏片、生化鉴定管、离心机、镊子、解剖剪、接种环、酒精灯、灭菌小青瓶、培养皿、离心管、玻璃匀浆器、滤器、玻片等。 3 实习内容 3.1 试验鸡人工感染病毒和细菌： 5月NaCl 0.8g、KCl 0.02g、Na2HPO4·12H2O 0.29g、KH2PO4 0.02g，加水至100ml，高压，备用。 3.2.6 将配制好的各种试剂装入瓶中，放入高压灭菌锅中，与洗涤干净的病毒分离器共同进行灭菌处理。 3.2.7 1%鸡红细胞的制备： 鸡翅静脉采血0.8ml，加入0.1ml 3.8%枸橼酸钠抗凝剂混匀，2000rpm低速离心10min，弃去上清，加入灭菌PBS重悬红细胞，离心，如此反复用PBS洗涤离心2-3次，最后按照1％红细胞的量用PBS重悬红细胞，即吸取0.5ml红细胞加入50ml PBS中制成1%鸡红细胞。 3.3 剖检 3.3.1 病理变化剖检：5月19日上午对人工发病鸡进行解剖，观察各个组织脏器的肉眼病变，做好记录。 A、先用水，最好是消毒药水浸湿尸体，以防羽毛粘手，影响操作。然后在大腿与腹壁之间各剪一剪，将大腿向两侧用力压，直至股骨头露出，使尸体平衡仰卧放置，以利剖检。 B、将腹壁皮肤横剪一缺口，向头侧掀开皮肤，注意肌肉有无出血或坏死。 C、沿腹壁至胸侧两边向前剪断肋骨。然后用力将胸骨掀开，暴露胸腹腔，观察肝脏、心脏、气囊等器官的病变。 D、在腺胃和食道之间剪断，用手将腹腔器官一并取出。剪开腺胃，观察腺胃的病变。剪开十二指肠、小肠后段、盲肠、泄殖腔等，并仔细观察病变。 E、剪开口腔、嗉囊、气管、支气管，并观察其病变。然后观察法氏囊有无病变及肾、卵巢、输卵管、肺脏等病变。 F、分离股肌，观察坐骨神经的病变。 G、脱离头皮，沿额骨前缘和眼的后方横断，自此处向两侧沿脑的轮廓向后剪开额骨，掀开，观察脑部变化。 其他：在剖检时，对死亡原因不明的病死鸡要注意全面观察，对死亡原因明确的鸡要有重点地进行剖检，以便发现特征性病变，及时作出诊断。 3.3.2分离细菌与病变脏器触片制作 对于病变明显脏器无菌分离细菌，划线分区接种于麦康凯平板与伊红美蓝平板各一块。对于病变明显脏器制作组织触片，进行革兰氏染色，并用油镜观察细菌。 脏器触片革兰氏染色方法如下： A、用灭菌手术剪剪取病变处脏器，将病变脏器切面轻触载玻片，或轻轻涂抹。 B、固定：将制成的涂片自然干燥后火焰固定，固定时通过火焰5-6次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 C、染色：初染，将载玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)，染色lmin，倾去染色液，用自来水小心地冲洗； D、助染，滴加革兰氏碘液，染lmin，同上水洗； E、脱色，滴加95%乙醇，脱色30s立即水洗； F、复染，滴加石炭酸复红（沙黄水），染色10-30s，水洗。最后用吸水纸轻轻吸干后镜检。 3.3.3分离病毒与鸡胚接种 采集病变的脏器（脑、肝、脾、肺、肾等），取红豆大小放入灭菌小青瓶中保存待用。5月19日下午进行接种用病料的处理及鸡胚接种。 将采集的病变脏器加生理盐水用匀浆器匀浆，倒入7ml离心管中，冻融，液氮中一次即可。融化后加入双抗（1：5），5000 rpm离心10min，取上清，用病毒分离器过滤，滤液接种鸡胚。 本次试验采用鸡胚绒毛尿囊腔内接种。取9-10日龄鸡胚，照蛋：以铅笔画出气室、胚胎的位置。用打孔器在酒精灯火焰灼烧消毒后，在气室顶端和气室下沿无血管处各钻一小孔，针头从气室下沿小孔处插入，深1.5cm，即已穿过了外壳膜且距胚胎