大鼠神经干细胞分离培养鉴定标准化protocol资料.docVIP

大鼠神经干细胞分离培养鉴定标准化protocol 一、大鼠神经干细胞分离和传代步骤 手术前准备1. 水浴锅温度调至 37° C。 组织解离液置 95%O2 5%CO2 培养箱中 10min。 3. 用 95%乙醇消毒解剖区。4. 用消毒溶液消毒解剖器械（戊二醛，后用无菌 dH2O 冲洗，浸泡在 95%乙醇中）。 在 3 个 60 × 15 mm 皿中各加 3ml 的组织解离液。 提示：除无菌显微解剖器材外，还要三套消毒器械，分别用于剥离皮肤、颅骨和脑，减少用手污染的机会。消毒过的解剖器械可以浸泡在无菌组织剥离液中，以避免乙醇接触组织。 分离脑组织 新生SD大鼠(出生48h内)直接断头。 剃去头顶的毛发。 用浸泡过聚维酮碘消毒的纱布擦洗头部并且去除松散的毛发。 用泡过 95％乙醇消毒纱布擦洗头部。 用手术刀片延中线全长切开头皮。 掀开皮肤显现出头盖骨。 从双耳后切开头皮暴露头盖骨侧面。 用小剪刀在两边切开头盖骨（打开头盖骨上部，避免损伤脑组织）。 用镊子掀开头盖骨。 注意：不能用表面有乙醇的解剖工具接触脑组织。乙醇能使组织固定。 用弯镊在脑底部滑动以切断连接脑底部的脊髓、血管和颅神经。 提示：用弯镊时轻微向下用力抵住脑下面的颅底。来回滑动松动脑组织。 取脑组织，D-Hanks液充分漂洗后. 用同一个弯镊将脑移到盛有解离液的 60mm 皿中。 剥离大脑表面