苹果砧木SH40MdNCED1基因克隆与表达分析.pdfVIP

植物遗传资源学报２０１４ꎬ１５(１):１５３￣１５９ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ＤＯＩ:１０.１３４３０/ ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｇｒ.２０１４.０１.０２１ 苹果砧木 ＳＨ４０ ＭｄＮＣＥＤ１基因克隆与表达分析 姜志昂ꎬ孙建设ꎬ彭建营ꎬ邵建柱 (河北农业大学园艺学院ꎬ保定０７１０００) 　 　 摘要:９￣顺式￣环氧类胡萝卜素双加氧酶基因是脱落酸合成途径的关键基因ꎮ 本试验通过ＲＴ￣ＰＣＲ结合ＲＡＣＥ技术从苹果 ＳＨ４０(Ｍａｌｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ × Ｍａｌｕｓ Ｈｏｎａｎｅｎｓｉｓ)茎尖组织中克隆了 １ 条 ＮＣＥＤ 基因ꎬ命名为 ＭｄＮＣＥＤ１(ＧｅｎＢａｎｋ 登录号为 ＫＣ８１６７３４)ꎮ 该ｃＤＮＡ序列全长２１７９ ｂｐꎬ包含１个编码６０６ 个氨基酸的开放阅读框ꎮ 氨基酸同源性分析表明ꎬＭｄＮＣＥＤ１与已 报道的其他植物物种的氨基酸序列具有 ６３７％ ~９３０％ 的相似性ꎮ 构建 ＭｄＮＣＥＤ１ 基因的原核表达载体 ｐＤＥＳＴ１５￣ ＭｄＮＣＥＤ１ꎬ转入大肠杆菌(ＤＥ３)ꎬ用ＩＰＴＧ诱导ꎮ ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ分析表明ꎬＭｄＮＣＥＤ１基因在大肠杆菌中被诱导表达的蛋白质分子 量与预期结果一致ꎮ 荧光定量结果表明ꎬＭｄＮＣＥＤ１基因在ＳＨ２８、Ｍ２６、ＳＨ４０ 及其嫁接品种嘎啦的表达趋势均呈先上升后下 降的趋势ꎬ同时与其矮生程度呈正相关ꎮ 　 　 关键词:苹果砧木ꎻＭｄＮＣＥＤ１ꎻ克隆ꎻ表达ꎻ原核表达 Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭｄＮＣＥＤ１ Ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ａｐｐｌｅ Ｒｏｏｔｓｔｏｃｋ ＳＨ４０ ＪＩＡＮＧＺｈｉ￣ａｎｇꎬＳＵＮＪｉａｎ￣ｓｈｅꎬＰＥＮＧＪｉａｎ￣ｙｉｎｇꎬＳＨＡＯＪｉａｎ￣ｚｈｕ (Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ＨｅｂｅｉꎬＢａｏｄｉｎｇ ０７１０００) Ａｂｓｔｒａｃｔ:９￣ｃｉｓ￣ｅｐｏｘｙｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ (ＮＣＥＤ) ｇｅｎｅ ｉｓ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｇｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｗａｙ ｏｆ ａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ. Ｉｎ ｔｈｉｓ ｒｅｓｅａｒｃｈꎬＮＣＥＤ ｇｅｎｅｉｎ ａｐｐｌｅꎬｄｅｓｉｇｎａｔｅｄａｓＭｄＮＣＥＤ１ (ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｕｍｂｅｒ:ＫＣ８１６７３４)ꎬｗａｓｉｓｏ￣ ｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ａｐｉｃａｌ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ａｐｐｌｅ ｒｏｏｔｓｔｏｃｋ ＳＨ４０ (Ｍ.ｄｏｍｅｓｔｉｃａ ×Ｍ.Ｈｏｎａｎｅｎｓｉｓ)ｂｙ ＲＴ￣ＰＣＲ ａｎｄ ＲＡＣＥ ｔｅｃｈ￣ ｎｏｌｏｇｙ.Ｔｈｅ ｆｕｌｌ￣ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ ｗａｓ ２１７９ ｂｐꎬｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ｔｈａｔ ｅｎｃｏｄｅｓ ６０６ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ.Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｈａｄ ６３７％￣９３０％ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｐｌａｎｔｓ.ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＭｄＮＣＥＤ１ ｇｅｎｅｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＤＥＳＴ１５￣ＭｄＮＣＥＤ１ꎬｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄ ｐｌａｓｍｉｄｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥ.ｃｏｌｉ. (ＤＥ３)ａｎｄｉｎｄｕｃｅｄｂｙ ＩＰＴＧ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆ ＳＤＳ￣ＰＡＧＥｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅ ｓｉｚｅ ｏｆ ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ.Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｒｅｎｄ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＳＨ２８ꎬＭ２６ꎬＳＨ４０ꎬａｎｄ ｔｈｅ ｇｒａｆｔｅｄ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ Ｇａｌａｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ.Ｔｈｅ ｅｘ￣ ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｉｓ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ａｓｓｏｃｉ