EphB4和EphrinB2和食管癌发生发展及其预后关系研析.pdfVIP

硕士研究生 胡同宇 导 师 吕全军副教授 陈萍萍副教授 郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室 郑州450002 中文摘要 从90年代以来，某些危险因素得到有效的干预和改善后，河南省食管癌发病率和死亡 率呈缓慢下降趋势，但仍明显高于全国平均水平【羽。因而，早诊早治以提高食管癌患者 的五年生存率成为目前研究的重要课题。随着分子生物学的发展以及各种分子实验方法 的完善和成熟，PCR、western blotting以及免疫组织化染色法等技术已比较成熟，从而 为我们从分子水平研究食管癌提供了良好的条件。Eph激酶是受体酪氨酸激酶的最大亚 家族，目前已明确有14种受体和8种配体，根据序列同源性和与配体Ephrins结合的特 EphB受体【5】。现已发现：在许多人类组织肿瘤中，两类Eph受体的基因或蛋白表达水 腺癌[15,161、子宫内膜癌【l7，堋、肺癌【19矧脑胶质瘤∞1胃癌【24】以及头颈部肿瘤的鳞癌[200-”． PCR和免 mRNA和蛋白水平及与临床病理参数关系，并且对食管癌患者进行术后随访，研究了 EphB4和EphrinB2两种基因对患者预后的影响。 嫠趟盘堂2地2届麴!．垒垃亟盘 生盟逸望 材料与方法 1．对象选择、组织样本的采集与患者l艋床病理资料的收集 选取2002年至2005年在医院就医的食管癌患者(征得同意后)作为研究对象，采集 手术后患者食管癌原发灶及其匹配的正常食管组织标本(经病理学签定)96对。标本离体 后立即放入液氮中，后放在一80℃冰箱中冷冻保存。收集患者的性别，年龄，家族史， 肿瘤的大小、病理分级、位置以及是否有淋巴结转移等l临床方面资料，用于统计分析和 研究。 mRNA水平的测定 2．样本中EphlM和EphrinB2 两种基因mRNA的表达。通过测定样本中目的基因模板的ct值即循环阈值来反映模板 的含量。 3．样本中EphB4和EphrinB2蛋白水平的测定 通过免疫组织化学染色法测定96例食管癌患者癌组织及其癌旁正常组织中EDhB4 数阳性细胞数，并计算阳性细胞百分比，每个患者的食管癌组织中阳性细胞百分比与正 常食管组织中阳性细胞百分比比值作为食管癌蛋白表达水平指标。 4．生存分析 者进行随访，患者手术治疗时刻作为生存的起始事件，随访时间结束作为终止时间，终 点事件与起始事件之间的时间间隔定义为患者的生存时间。 5．统计学分析 别、年龄、家族史、肿瘤的大小、病理分级、位置以及是否有淋巴结转移等的食管癌样 基因表达量之间的相关性采用Pearson’s相关分析。绘出每一种基因的表达阳性与阴性 Ⅱ 采用Cox回归(比例危险率回归模型)分析临床参数与基因表达对生存的影响。以OF0．05 作为检验水准。 结果 1实时荧光定量PCR结果 实时荧光定量PCR结果显示，在96例样品中，与匹配正常食管组织相比，EphB4 素分析表明，食管癌组织与匹配正常食管组织相比EphB4基因的mRNA的表达水平差 EphrinB2基因的mRNA的表达呈现高度正相关(，=o．520,P=0．000)． 1．2EphB4和EphrinB2基因在食管癌组织中的表达与临床参数之间的关系 EphB4表达水平显著高于肿瘤体积小的癌组织(卉14．415,P=0．001)． 有家族史的患者的癌组织EphrinB2表达水平显著高于无家族史患者的癌组织 (知．075，P=o．048)。 2免疫组化结果 2．IEphB4和EphrinB2蛋白在食管癌组织中与正常食管组织中的表达 PCR 结果相一致。 2．2EphB4和EphrinB2蛋白在食管癌组织中的表