12 基因工程的基本操作程序详解.ppt

基因文库包括： 基因组文库：包含一种生物的所有基因。 部分基因文库：只包含一种生物的一部分基因。 例：cDNA文库（互补DNA）：用某种生物发育 的某个时期的mRNA反转录产生的。 2.利用PCR技术扩增目的基因 称多聚酶链式反应 穆里斯等人于1988年发明的。 PCR是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 3、人工合成法 如果基因比较小，核苷酸序列又已知，可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 1）反转录法：就是以目的基因转录出的mRNA为模板，反转录成单链DNA，再合成双链DNA。 2）直接合成法：就是以已知蛋白质的氨基酸序列为基础，推出mRNA的核苷酸序列，再推出目的基因序列，然后进行人工合成。 注：从基因文库中获取目的基因和利用PCR技术扩增目的基因时，目的基因已经存在，而人工合成目的基因时目的基因从无到有。 1.下列有关PCR过程的叙述中不正确的是（ ） A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现 B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高 位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质，但启动子本身不被转录 注： 终止子：是指DNA分子上决定转录停止 的碱基序列。 终止密码子：是指mRNA上决定翻译停止 的三个相邻碱基。 三、将目的基因导入受体细胞 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。 1、将目的基因导入植物细胞 常用：农杆菌转化法 易感染双子叶和骡子植物，当植物受伤时，伤口处的细胞会分泌大量酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，此时农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA（可转移DNA）可转移至受体细胞，并整合到受体细胞染色体DNA 上。 基因枪法：单子叶植物常用，成本高 花粉管通道法：十分简便经济的方法 （我国首创） 2、将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射技术 （2）受体细胞：受精卵 （3）程序： 注： 1）感受态细胞：细胞处于一种能 吸收周围环境中DNA分子的生 理状态。 2）微生物为受体细胞时，GaCl2不 仅能使微生物细胞转化为感受 态细胞，而且还能增大微生物 细胞的通透性，使基因表达载 体易于进入受体细胞。 注： 基因工程中目的基因的表达和正常情况下基因的表达一样，也包括转录和翻译两个过程。对其性状的控制包括：1）直接合成相应的蛋白质来控制某一性状。2）通过控制酶的合成来控制新陈代谢，进而控制生物性状。 2008年诺贝尔化学奖授予了“发现和发展了水母绿色荧光蛋白“的三位科学家。将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，再将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质就会带有绿色荧光。绿色荧光蛋白在该研究中的主要作用是 A．追踪目的基因在细胞内的复制过程 B．追踪目的基因插入到染色体上的位置 C. 追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布 D．追踪目的基因编码的蛋白质的空间结构。 继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答： （1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是____________________。 （2）进行基因转移时，通常要将外源基因转入__________中，原因______________________ （3）通常采用____________________技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。 （4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的__________细胞中特异表达。 抗虫、抗病的接种实验：是否有抗性或抗性的程度。 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 对基因工程的产品与天然产品的功能进行比较：功能 是否相同。 C 显微注射技术 受精卵 受精卵（或早期胚胎细胞）具有全能性，可使外源基因在相应的组织细胞中表达。 DNA分子杂交 膀胱上皮 （或早期胚胎） A就是腺嘌呤，T就是英文的three，P是指phosphate 即磷酸。 ATP，GT