《人eIF4A3真核表达载体构建及稳定表达细胞株筛选》.docVIP

人eIF4A3真核表达载体构建及稳定表达细胞株筛选 李向云1，2，徐祥2，李秉煦1，黄宏2，徐云升1* （温州医学院附属第一医院皮肤科，325000） 摘要：目的 构建人eIF4A3重组质粒载体,并筛选高表达人eIF4A3的稳定细胞株。方法 RT-PCR克隆eIF4A3基因，并将获得的基因片段分别连接到含有HA和c-myc标签的质粒载体上，转染Hela细胞，后经G418筛选获稳定表达细胞株，同时在体外翻译体系中进行体外翻译，并通过免疫印迹鉴定eIF4A3的表达。结果 成功构建人eIF4A3的真核表达载体，可在Hela细胞中稳定表达，且能在体外翻译体系中翻译eIF4A3蛋白质，功能研究初步证明eIF4A3可以抑制荧光素酶报告基因的表达。结论 获得了可稳定高表达人eIF4A3的Hela细胞株，以及可用于体外翻译的真核表达载体。 关键词：真核起始因子4A3；稳定细胞株；体外翻译 中图分类号：Q786 文献标识码：C Construction of Eukaryotic Expression Plasmid and Establishment of Stable Cell Line for Human eIF4A3 Expression Li Xiangyun1,2, Xu Xiang2, Li Bingxu1, Huang Hon