生物化学实验指导要点分析.docVIP

目 录 氨基酸的纸层析 1 蛋白质的沉淀反应与盐析作用 3 凝胶过滤法使蛋白质脱盐 　　 5 Folin酚法测定蛋白质含量 7 紫外分光光度法测定蛋白质含量 9 酵母RNA的提取及其组分的鉴定 11 酶的基本性质实验 13 脲酶Km值的测定 16 鱼细胞ATP酶活性的测定　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 18 还原糖和总糖含量的测定(3,5—二硝基水杨酸法) 20 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质 22 SDS—PAGE法测定蛋白质的分子量 　　　　 　 25 油料种子油脂含量的快速测定 27 血清胆固醇的测定（磷硫铁法） 29 粘多糖肝素纳效价的测定 31 维生素C含量的测定(2,6－二氯酚靛酚滴定法) 33 E.coli感受态细胞的制备及转化 35 质粒DNA的提取,酶切和电泳鉴定 36 紫外分光光度法测定核酸含量 39 DNA片段的PCR扩增 41 发酵过程中无机磷的利用 42 附录1 生化实验室学生实验守则 44 附录2 生化实验室操作安全注意事项 45 附录3 实验室意外事故的紧急处理措施 46 实验一、 氨基酸的纸层析 一、实验目的和要求 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 二、实验原理 纸层析法(paper chromatography)是最简单的液—液相分配层折，它以滤纸作惰性支持物，其原理主要是分配作用，辅以吸附和离子交换作用,即主要是利用物质在两种不相混合溶剂中的分配系数不同,而达到分离目的。通常用(表示分配系数.在一定条件下,某种物质在特定溶剂系统中的分配系数是一个常数. (=溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度 滤纸纤维上的羟基具有亲水性，当支持物被水饱和时,通过氢键被纤维素分子表面的羟基吸附的水分子扩散性大大降低,不具流动性,故滤纸及被吸附的水可作为层析的固定相，而与固定相不相混溶的有机相则为层析的流动相。如果有多种物质存在于固定相和流动相之间，将随着流动相的移动进行连续和动态的不断分配。由于各物质分配系数的差异，移动速度就不一样，按照相似相溶的规律，分配系数大的溶质在固定相中分配的数量多,在纸上移动速度慢，反之则快。最后不同的组分可以彼此分开。 物质分离后在图谱上的位置可用比移值Rf表示： Rf= 特定化合物在特定的展层系统和特定的温度下，Rf是个常数，Rf值与分配系数α有如下关系； 　　α = 式中Ar和As分别表