11第十章 蛋白质.pptVIP

二、氨基酸自动分析仪法 原理：氨基酸的组分分析，现在广泛地采用离子交换法，并由自动化的仪器来完成。其原理是利用各种氨基酸的酸碱性、极性和相对分子质量大小等性质，使用阳离子交换树脂在层析柱上进行分离。当样液加入层析柱顶端后，采用不同pH和离子浓度的缓冲溶液即可将它们依次洗脱下来。即先是酸性氨基酸和极性较大的氨基酸，其次是非极性的芳香性氨基酸，最后是碱性氨基酸。相对分子质量小的比相对分子质量大的先被洗脱下来。洗脱下来的氨基酸可用茚三酮显色，进而定量分析。定量测定的依据是氨基酸和茚三酮反应生成蓝紫色化合物，其颜色深浅与各氨基酸的含量成正比。脯氨酸和羟脯氨酸则生成黄棕色化合物，可在不同波长处比色测定。 三、气相色谱法 原理：将本身没有挥发性的氨基酸转变为适合于气相色谱分析的衍生物-三氟乙酰基正丁酯。它包括用正丁醇的酯化和用三氟乙酸酐（TFAA）的酰化两个步骤。将酰化好的氨基酸衍生物进行气相色谱分析。 四、高效液相色谱法 高效液相色谱法适于分析沸点高、相对分子质量大、热稳定性差的物质和生物活性物质。用于氨基酸的分析已进行了大量的研究工作，并已取得了广泛应用。由于大多数氨基酸无紫外吸收及荧光发射特性，而紫外吸收检测器（UVD）和荧光检测器（FD）又是HPLC仪的最常用配置，故人们需将氨基酸进行衍生化，使其可以利用紫外吸收或荧光检测器进行测定。 氨基酸的衍生可分为柱前衍生和柱后衍生。柱后衍生需额