显微技术第六章原位杂交组织化学技术详解.ppt

核酸的分子杂交(molecular hybridization)技术是目前生物化学和分子生物学研究中应用最广泛的技术之一，是定性或定量检测特异RNA或DNA序列片段的有力工具。它是利用核酸分子的碱基互补原则而发展起来的。 核酸杂交 原位杂交属于固相核酸分子杂交的范畴，但它区别于固相核酸分子杂交中的任何一种核酸分子杂交技术： 菌落杂交系细菌裂解释放出DNA，然后进行杂交； 斑点杂交是检测特定的DNA片段； Southern印迹杂交法是以鉴定DNA中某一特定的基因片段； Norhtern印迹杂交法是用以检测某一特定RNA片段； 分子杂交技术 分子生物学中用于检测生物样本中是否含有特定的生物分子的一门技术。 原位杂交组织化学技术(in situ hybridization histochemistry；ISHH) 简称原位杂交,是在一定的温度和离子浓度下，使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的核酸复性结合而使得组织细胞中的特异性核酸得到定位，并通过探针上所标记的检测系统将其在核酸的原有位置上显示出来。 核酸分子杂交除了能在变性的单链DNA间进行外，在DNA与RNA间、RNA与RNA间，以及寡核苷酸与DNA或RNA间也可通过碱基配对(A-T、、C—G、A—U)实现分子杂交。因此，核酸分子杂交所用的探针种类可以是DNA、RNA或寡