氟苯尼考残留检测ELISA试剂盒说明书.docVIP

氟苯尼考（Florfenicol）ELISA检测试剂盒说明书 原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗体，加入酶标后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应残留物的含量。 试剂盒交叉反应率 …………………100% 氟苯尼考胺…………………4.1% 甲砜霉素………………… 1%氯霉素………………… 0.1% 试剂盒组成 标准液瓶：（1ml/瓶）0ppbppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb 酶标记物 …………………12ml 抗体液…………………7ml 底物 A液 …………………7ml 底物 B液 …………………7ml 终 止 液 …………………7ml 20X浓缩洗涤 …………………40ml 2X浓缩复溶液 …………………50ml 所用仪器、试剂 仪器：微孔板酶标仪氮气吹干装置均质器振荡器离心机刻度移液管天平感量0.01g 微量移液器：单道 20l-200μl、100l-1000μl、多道 250l 试剂：乙酸乙酯正己烷样本前处理步骤样本处理前须知 处理任何样本时，都必须注意： （a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。 （b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染，干扰实验结果。样本前处理需配制： 将浓缩复溶液用去离子水按1：1稀释。(用样本提取后的复溶) （a）组织 (鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼等)前处理方法 用均质器均质组织样本；称3±0.05g样本于离心管中，加入6ml乙酸乙酯，振荡min，室温以上，离心10min；取出ml上层液体在5060℃下氮气/空气吹干或旋转蒸发仪蒸干 加入1 ml正己烷溶解干燥的残留物，再加1ml稀释后的复溶液强烈振荡，室温以上。用于分析。样本稀释倍数： （）蜂蜜 取2±0.05 g蜂蜜，放入离心管中，用4ml去离子水溶解；加入4ml乙酸乙酯上下振荡min；室温以上离心10min；移取1ml上层乙酸乙酯（相当于0.5g样本）到另一离心管中，5060℃氮气流下干燥；用0.5ml稀释后的复溶液溶解30s；取50?用于分析。 样本稀释倍数：1 检测下限：ppb 定量下限：ppb 酶标免疫分析程序测定前应须知： 使用之前将所有试剂和需用板条回升至室温（20-25℃）。使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。操作步骤 从4℃冷藏环境中取出所需试剂，置室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔及框架，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。加标准品/样本 50l/孔到各自的微孔中，然后加抗体50l/孔，用盖板膜封板，轻轻振荡混匀。℃环境中反应。取出将孔内液体甩干，用洗液250l/孔洗板45次，每次间隔10秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。每孔加入100μl，盖板膜盖板后置℃环境中反应30min。将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗45遍（同上），用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。 显色：每孔加入底物A液50l，再加B液50l，轻轻振荡混匀，℃环境中避光显色min。测定：每孔加入终止液50l，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，在5min内读完数据），测定每孔OD值。 结果判定 所测得的标准液和样品吸光度的平均值除以第一个标 准液（0标准液）的吸光度值再乘以100，得到百分吸光度值。 0标准液的百分吸光度值等于100%。 标准液的吸光度值（或样品） -----------------------------------×100 = %吸光度值 0标准液的吸光度值 以标准品浓度的以10为底的对数为X轴， 百分吸光值为Y轴，绘制标准曲线。将样本的百分吸光值代入标准曲线，从标准曲线上读出样本所对应的值，作为10的幂，乘以稀释倍数，即为样品中所含AOZ的量。 若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析检测方法灵敏度、准确度、精密度 试剂盒灵敏度：0.5ppb 样本最低检测限： 蜂蜜ppb 鸡肉/鸡肝、猪肉/猪肝、虾鱼ppb 回收率： 鸡肉/鸡肝、猪肉/猪肝、虾、鱼±10% 蜂蜜