实验十一血清alt测定（赖氏法）.docVIP

实验十五 血清ALT测定（赖氏法） 【目的】 1.了解血清ALT活性测定的原理及测定方法。 2. 掌握血清ALT 活性测定的临床意义。 【原理】 丙氨酸与α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶（ALT）的作用下生成丙酮酸和谷氨酸。在反应到达规定时间时，加入2，4-二硝基苯肼-盐酸溶液以终止反应。生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。后者在碱性条件下显棕红色。根据颜色的深浅，求得血清中丙氨酸氨基转移酶的活力。反应式如下： 【器材】 试管、刻度吸管、恒温水浴箱、分光光度计。 耗材：血清，座标纸等。 【试剂】 1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4） 称取磷酸氢二钠 Na2HPO4，AR 11.928g，磷酸二氢钾 KH2PO4，AR 2.176g，加少量蒸馏水溶解并稀释至1 000ml。 2. ALT底物液 称取α-酮戊二酸29.2mg，DL丙氨酸1.79g于烧瓶中，加0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液80ml,煮沸溶解后冷却，用1mol/L NaOH调节pH至7.4（约加入0.5ml），再用0.1mol/L 磷酸盐缓冲液在容量瓶内加至100ml，混匀，加氯仿数滴，置冰箱可保存数周。 3. 丙酮酸标准液（2μmol/ml） 精确称取丙酮酸钠 AR 22.0mg于100ml容量瓶中，加0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液至刻度。 4