氨基酸聚酰胺薄膜层析资料.docVIP

氨基酸聚酰胺薄膜层析——DNS-Cl法 一、实验目的： 1．掌握聚酰胺薄膜层析技术的基本方法和应用。 2．熟悉蛋白质及肽的N末端氨基酸DNS分析法。 二、实验原理： .1.层析技术 ①概念：是利用化合物中各组分的物理性质的差别（如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、分子极性等）使各组分在两相中的分布不同，从而使各组分以不同速度随流动相向前移动而达到分离的目的。 ②特点：分离效率高，能分离各种性质相类似的物质。不仅可用于少量物质的分离纯分，也可用于大量物质的分离纯化和制备。 ③层析法的分类 气相层析（以气体为流动相的层析法） 液相层析（以液体为流动相的层析法，此为生物化学领域里常用的方法） I.吸附层析：薄层吸附层析、吸附柱层析 II.分配层析：纸层析、柱层析、薄层层析 III.离子交换层析 IV.凝胶层析：柱层析、薄膜层析 V.亲和层析 ④纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法是用滤纸为支持物进行层析的方法，所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。将样品点在滤纸上(此点称为原点)，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配