实验十四样品中菌落总数的检测重点分析.docVIP

实验十四 样品中菌落总数的检测 一、目的学习并掌握2.培养基:营养琼脂培养基 3.设备仪器:10ml菌吸管1支、1ml菌吸管4支、菌带管3支、菌空培±1℃、天平等。 三、基本原理 菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1克或1毫升检样中所含细菌菌落的总数。 菌落总数主要作为制定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 每种细菌都有它一定的生理特性，培养时，应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、pH、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法去作细菌菌落总数的测定。所得结果，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。 四、检验程序 菌落总数的检验程序如下： 五、操作步骤 1．检样稀及培养 (1)以无菌操作，将样25g(或25ml)剪碎放于含有225ml菌生理盐水或其他:10的均匀稀释液。 10000r/min的速度处理1分 (2)用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释ml时，沿管壁徐徐注入含有ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)振摇试管混合均匀作成1:100的稀释液(3)另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增稀释次， 即换用1支灭菌吸管。 (4 )根据食品卫生标准要求或对标本情况的估计，选择23个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 (5)稀释浓移平皿后，应及时将凉至营养琼脂培养基(可放置于±1℃水浴保温)注平皿约ml，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌内作空白对照。 (6)待琼脂凝固后，翻转平板，置±1℃温箱内培养24土2h(肉、水产、乳和蛋品为48±2h)取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克(或毫升)样品所含菌总数。 2．菌落方法 作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的落数后，求出同稀释度的各平板平均落数。 3．菌落计数的报告 (1)平板落数的选择 选取菌落数在30300之间的平板作为落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状落不到平夜的一半，而其余一半中分布又很，即可计算半个平板后乘2以代表全菌落。 (2)稀释度的选择 应选择平均菌落数在30300之间的稀释，以稀释倍数报告之(见表例1)。 ②若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，则视二者之比如何来决定，若其比值小于2，应报告其平均数若大于2则报告其中较小的数字(表例2及3)。 若所有度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以倍数报告之(见表例 ④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表例5)。 ⑤若所有稀释度均无菌落生长，则以小()1乘以最低稀释倍数报告之(表例⑥若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，其中一部分大于300或小30 时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表例7)。(3)菌数的报告 菌落数在100以内时，按其实有数报告大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零，也可用10的指数来表示(见表报告方式栏)。 结果  将实验测出的样品数据以报表方式报告结果。ml 报告方式 个/g或个/ml 10-1 10-2 10-3 1 多不可计 164 20 － 1640 16000或1.6×10-4 2 多不可计 295 46 1．6 37750 38000或3.8×0-4 3 多不可计 271 60 2．2 27100 27000或2.7×0-4 4 多不可计 多不可计 313 － 313000 310000或3.1×10-5 5 27 11 5 － 27 270或2.7×10-2 6 0 0 0 － ﹤1×10 ﹤10 7 多不可计 305 12 － 30500 31000或3.1×10-4 实验十五样品中大肠群检验、目的要求 学习大肠菌群菌数的检测原理和方法。 二、实验材料 1仪器±1℃温箱、天平、显微镜、平皿、±0.5℃水浴管、吸管、载片 2.培养基及试剂乳糖胆盐管、伊红美兰琼脂培养基、乳糖发酵、革兰染色液、芽染色液 三、基本原理 大肠菌群系指一群在24小时能发酵乳糖、产酸、产气需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽杆菌。该菌主要来源于人畜粪