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西北农林科技大学 级硕士研究生 学 院： 学科、专业： 研 究 方向： 研 究 生： 指 导 教师： IL-22能够在甲型流感病毒感染过程中减轻肺部炎症并且保护肺免受继发性细菌感染 IL-22在自身免疫性疾病、炎症反应和传染性疾病中具有保护或致病的作用。这里，我们要研究在致命和非致命的呼吸性H3N2甲型流感病毒(IAV)感染过程中，IL-22在宿主防御和发病机理方面的潜在作用。结果表明，IL-22以及与其产生相关的因子在IAV感染的早期阶段于肺组织中均有表达。数据显示，RORγt阳性αβ和γδＴ细胞和固有淋巴细胞，表现出在感染后２天IL-22的合成加强。在致死和非致死的IAV感染中，内源性IL-22在抑制IAV复制和在IAV-特异性CD8+T cell应答过程中没有发挥作用。在致命性感染中，野生型小鼠死于重症肺炎，缺乏IL-22并没有使IAV发病和动物死亡加速或延迟。对照组中，在非致命性IAV感染过程中，缺少IL-22的动物肺部损伤加强并且相对于野生型同窝出生的幼鼠显示出较低的气道上皮细胞完整性。重要的是，内源性IL-22在肺损伤中的保护作用与进一步控制继发性细菌感染有关。在攻入肺炎链球菌后，就存活率和肺部细菌负荷而言，感染过IAV的IL22/动物较野生型动物对照更易受到影响。IL-22在致命性感染中虽然不发挥重要作用，但在非致命性IAV 感染中是有益的，它可以减轻肺部炎症反应和随后的继发性细菌感染。 曼氏裂体吸虫 材料和方法 病毒，细菌和老鼠。高致病性人H3N2甲型流感病毒。IL22/小鼠，在C57BL/6中至少杂交10次，同窝出生的野生型对照也是如此。RORγt绿色荧光蛋白小鼠。8-10周龄大雄性小鼠。 抗体和试剂。抗小鼠TCRβ，TCRγδ单克隆抗体，CD45，NKp46，CD127， CD90.2，链霉亲和素，CD4 。抗小鼠IL-22单克隆抗体，重组的IL-22。 IAV感染和定量RT-PCR对基因表达的评估。对小鼠进行麻醉，鼻内接种50μL PBS，包含不同剂量(50或600 PFU)的H3N2病毒。从完整肺中或从受IAV感染的小鼠支气管肺泡灌洗液中重获的细胞中提取总RNA，cDNA通过经典程序合成。具体的引物gapdh,，Ifng，IL17α，mx1，Ifnb，IL22和IAV M2基因之前已描述过。此外，用到了下列引物：IL22bp，5′-ACTCTGCCTGGACCAGG ACA-3′和5′-GAGAAGCACCCGCAAAGATG；IL23p19,5-AATCTCT GCATGCTAGCCTGG-3′和 5′-GATTCATATGTCCCGCTGGTG-3′; IL1b,5-TCCCCAACTGGTACATCAGCA-3′和5′-ACACGGATTCCA TGGTGAAGTC-3′; Rorgt,5′-TGAAAGCAGGAGCAATGGAAGT-3′ 和 5′-ACAGCTCCACACCACCGTATTT-3′;Ahr,5′-ATCGACATAAC GGACGAAATCC-3和 5′-TTAGGTGCTGAGTCACAGGCTG-3′;IL6, 5′-AGCCTCCGACTTGTGAAGTG-3′和5′CTGATGCTGGTGACA ACCAC-3;IL17f,5′-TGTCCTCCCCTGGAGGATAAC-3′和5′-GAAC TGGAGCGGTTCTGGAA-3;IL21,5-AAACTCAAGCCATCAAACCCT G-3′和 5′-TGTTTCTTTCCTCCCCTCCTG-3′; Tnfa,5′-CATCTT CTCAAAATTCGAGTGACAA-3和 5′-TGGGAGTAGACAAGGTAC AACCC-3′。△CT值通过扣除原始周期阈值获得，测CT是为了获得gapdh mRNA，它是研究基因内参标准。 IAV感染过程中IL-22在RORγt阳性细胞中的转录水平分析RORγt-GFP小鼠被IAV感染或不感染，肺部单核细胞是被感染了60h后的，RORγt阳性αβＴ淋巴细胞 (CD45+TCRβ+），γδＴ淋巴细胞 (CD45+TCRγδ+)和 TCRαβ-TCRγδ-（CD45+TCRβ-TCRγδ-)细胞从感染了IAV小鼠体内分离得到。IL-22转录表达通过定量RT-PCR完成。 对IL-22生成细胞的分析。在IAV感染后两天进行对IL-22生成细胞的相关评估。作为一个可能的对照，肺部单核细胞在完全培养基中培养（含10ng重组的小鼠IL-1β/ml和IL-23加上10μg布雷菲德菌素A/ml，于37℃培养4h。激