27细菌分析方法(总括).docVIP

细 菌 检 测 方 法 抽样调查 A 确认检测样品 品名 制造年月日 检测目的 检测项目 B 选取检测样品 a) 样品要每批抽样检测。 b) 抽取样品时不要混入异物，避免微生物的二次污染。 c) 检测细菌抽样时一定要用灭菌的器具和容器，做到无菌操作。 d) 装样品最好采用方便于搬运、洗涤、灭菌的容器――适用于样品种类、形状、检测项目。 e) 抽取的样品要贴上标签，写上必要事项(品名、制造年月日等等)。 f) 检测前，抽取的样品要冷冻保管。 灭菌法 细菌检测时,采用直接接触稀释液或其他样品的器具必须要充分完全灭菌。 高压蒸汽灭菌(高压灭菌器) A: 用于对培养基和稀释水的灭菌. 培养基: 121℃ / 20分 稀释水: 121℃ / 15分 B:干热灭菌(干燥器): 用于对均质器、吸量管器具的灭菌。 干燥器内180℃/10分钟自然冷却。 C: 火焰灭菌(煤气喷灯): 用于镍铬丝(金属棒)、镍铬环(金属环)的灭菌 用煤气喷灯将白铁丝和圈加热到变红进行杀菌。 培养基配制 使用市面上销售的粉末状培养基，把粉末培养基和一定量的水加入烧杯中加温溶解，根据使用目的分别注入试管里. A: 液体培养基：把培养基和定量的水加入试管里加温溶解后灭菌。 B：液体培养基裝入三角烧瓶中。 平板培养基 1) 加温熔解后灭菌，冷却４５到50℃。 2) 分别注入灭菌后的平皿中15到20毫升,快速使之冷却凝固。 3) 待培养基的表面凝固后放入恒温箱中进行培养。 样品液的准备 1) 被冷冻的样品在2--4.4℃状态下,18小时以内解冻检测.(短时间解冻的时在５℃以下在１５分钟之内进行)。 2) 装入样品的容器用70～75%的酒精仔细擦拭,采用灭过菌的器具开封。 3) 固体物用杀菌过的剪刀类的工具切成细条或碎块。 4) 随机取25克样品放进均质器的杯里。 5) 倒225克杀菌磷酸稀释水调整均质器使之均匀化.(按照每分钟８０００/rpm进行2分钟)………10倍稀释液 6) 把10毫升10培液加入90毫升灭菌磷酸稀释水混合……100倍稀释液 7) 把1毫升１００培液加入9毫升灭菌磷酸稀释水混合……１０００倍稀释液 8) 把1毫升1000培液加入9毫升灭菌磷酸稀释水混合…….10000倍稀释液 9) 依此类推往下都是十进制 杀菌磷酸稀释水的配制 a) 将34克磷酸二氢钾用500毫升溶解，再加入175毫升1mol/l的氢氧化钠溶液,随后定溶1000毫升蒸溜水。 b) 把PH调整到7.2作为原液。 ※原液放在阴冷处保管 ※1N氢氧化钠:精确计量42克氢氧化钠(分析纯)用蒸溜水溶解定容1000毫升。 稀释水：取储存液1.25ml，用蒸馏水稀释至1 000ml，分装每瓶100ml或每管10ml，121℃/15分钟进行高压蒸汽杀菌，杀菌后用水快速冷却。 Ⅰ 菌落总数 A: 培养基的配制 标准琼脂培养基(22.5g/1000ml) 取适当量加入三角烧瓶里(200到300毫升的)加温溶解后121℃/15分钟杀菌. B: 检测 1) 稀释倍数的确定 预测样品的细菌污染程度，设定1毫升中生菌仅仅30到300个存在. ¤假设某样品的生菌数为500000/g,如果做这种试料样品的10000倍稀释液时,其中就包含了５０个的生菌数.因此,要前后设置10倍的空间来设定１０００倍、１００００倍、１０００００倍三个稀释倍数。 2) 检测: a) 在第一阶段准备２个平皿分别接种１毫升调整的稀释溶液. b) 把保持45～50℃的标准琼脂培养基分别注入上述浅底盘里15到20毫升，混合均匀后放置凝固. c) 凝固后同样在其表面再倒入几层五毫升左右的培养基. d) 在培养箱内将其颠倒放置,35±1℃的温度培养48±2小时 e) 培养后,采用菌落计数来数发生的菌落数. [每１枚平板的菌落数×稀释倍数等于生菌数/g] *生菌数的计算法另记 Ⅱ大肠菌群 大肠菌群的检测是根据检体样品的种类的不同而异. 出素法……冷冻食品 FD制品 BGLB法……浓缩汁、粉末调味料、鲸鱼制品、AD热风烘干片 MPN法……FD制品 出素法 A: 培养基的配制 a) 去氧胆酸盐琼脂(40g/1000ml) 取适量培养基放入三角烧瓶里(２００到３００毫升的)加温溶解，放进45—50℃的温水中保温不要让之凝固。 b) EMB培养基(40.1g/1000ml) 取适量培养基放入三角烧瓶里(２００到３００毫升)加温熔解后， １２１℃/15分钟杀菌. c) 乳糖培养基(18g/100ml) 把加温溶解的培养基分别注入试管10毫升，１２１℃/15分钟杀菌快速冷却. B: 检测 1) 准备2只培养皿，分别接种1毫升的样品10倍稀释液,预先加温溶解