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实验2植物减数分裂染色体制备
实验2? 植物减数分裂染色体制
一、实验目的
掌握花粉母细胞染色体制片技术;
了解减数分裂过程中染色体的变化特征。
增强对植物细胞减数分裂的感性认识,进一步加深对减数分裂的理解。
二、实验原理
减数分裂的概念理解。
减数分裂过程中的染色体变化的特点。
减数分裂的遗传学意义。
由于植物花药取材容易,操作方便,一般作为减数分裂制片材料,在发育的适宜时期取样、固定、压片等程序,便可在显微镜下观察到减数分裂时染色体的行为变化。
三、实验材料、器具及试剂
黑麦幼穗
镊子、载玻片、盖片、解剖针、吸水纸
醋酸洋红、改良卡诺固定液(95%乙醇∶冰醋酸=3∶1)
1.取材:选取适宜的小花或小穗,是实验的关键。不同材料鉴别方法不同。一般在9-11时固定,不需预处理。
:在旗叶挑出后,旗叶与叶的叶耳间距为3-4cm左右时,花药黄绿色,即处于减数分裂时期。8-10点为取材最佳时间。
2.固定:将所取的幼花序立即放入固定液中固定2-24小时。经95%、80%酒精冲洗后,保存于70%酒精中保存备用。 (1) 迅速防止细胞死亡后的变化,防止自溶、腐败,尽量保持生长状态结构。
(2) 使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质,以保持生前的形态。
(3) 使组织内各种物质成分产生不同的折光率,便于观察和鉴定。
(4) 使不同组织成分对染料有不同的亲和力,便于染色。
(5) 防止细胞过度收缩或膨胀,失去原有的形态结构。
3.制片:取一小穗置载片上,用解剖针3-4段(或加以纵切),加1滴醋酸洋红(或改良苯酚品红)染液。用解剖针轻压花药,使花粉母细胞从切口出来。静置染色5-10分钟。去除残存的花药壁,加盖玻片,使染色液刚好布满,在盖玻片与载玻片之间成一薄层(不能过多,以防止花粉母细胞溢出盖玻片的边缘)。观察分裂相
4.烤片:用镊子夹住载片,在酒精灯上来回移动,并不时将片子放在手背上试温,以不烫手为宜。经烤片后,细胞质颜色减退,使染色体得到充分鲜明的着色。 5.置换:若染色太深,可从盖片一侧滴加45%冰醋酸,在另一边用滤纸吸,让冰醋酸从盖片下流过,置换出染液,使细胞质背景颜色变浅。
6.压片:在盖片上覆以滤纸,用拇指均匀用力压下,勿使盖片移动。镜检
四、作业
记录观察到的时期,绘成简图。
固定的目的什么?(思考题)
附:1%醋酸洋红配制:
1克洋红,加入100ml45%醋酸,煮沸1小时,保存备用,用时过滤。加Fe(Ac)3媒染剂或放一生锈的铁钉,染色效果好。
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