第十六章经典液相色谱法.ppt.pptVIP

2.分配系数与保留行为的关系 3.K值在四种类型色谱法中的含义 吸附色谱：利用吸附剂对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂或气体洗脱，以使组分分离。  分配系数与保留行为的关系 要求：具有较大的吸附表面和一定的吸附能力，颗粒应有一定的细度且粒度要均匀  常用吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭 结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心 特性： 1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附中心，不易洗脱 吸附活性次序：活泼型束缚型游离型 2）吸水→失活 →105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 →500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力 （2） 氧化铝 碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质 3.色谱分离条件的选择 （4） 三者关系： 组分 吸附剂 流动相 极性 活性小 极性 非(弱)极性 活性大 非极性或弱极性 二、 液-液分配柱色谱法 1.原理 以液体作为固定相和流动相，利用被分离物质组分在固定相和流动相中的溶解度不同，造成分配系数上的差异而实现分离的色谱方法。 反相色谱： 固定相：石蜡油，化学键合相（如十八烷基硅胶键合相） 流动相：水、甲醇、乙腈等强极性有机溶剂 洗脱顺序：极性大，先出柱；极性小，后出柱。 应用：适合于脂溶性成分，如高级脂肪酸、油脂 三、离子交换色谱法： 1.原理：可交换离子与树脂上的交换基团进行离子交换，并被吸附，用适当的溶剂从柱上洗脱下来，实现物质的分离。 2.固定相：离子交换树脂 b.阴离子交换树脂 强碱性阴离子交换树脂 [R-N（CH3）+3OH-] 弱碱性阴离子交换树脂 （三）离子交换平衡 四、间排阻色谱法 空间排阻色谱法也称凝胶色谱法，是一种根据试样分子的尺寸大小进行分离的色谱技术。 1.原理 空间排阻色谱的色谱柱的填料是凝胶，它是一种表面惰性，含有许多不同尺寸的孔穴或立体网状物质。 对不同大小的组分分子，可分别渗入到凝胶孔内的不同深度，大个的组分分子可以渗入到凝胶的大孔内，但进不了小孔甚至于完全被排斥。小个的组分分子，大孔小孔都可以渗入，甚至进入很深，一时不易洗脱出来。因此，大的组分分子在色谱柱中停留时间较短，很快被洗脱出来，它的洗脱体积很小，小的组分分子在色谱柱中停留时间较长，洗脱体积较大，直到所有孔内的最小分子到达柱出口，完成按分子大小而分离的洗脱过程。 2.凝胶的结构与选择 葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶 特点：分离效能高，斑点集中 灵敏度高 展开快 仪器简单，操作方便 比移值与相对比移值 1. 比移值Rf(retardation factor；Rf) 比移值 L0 例1：化合物A在薄层板上从原点迁移7.6cm，溶剂前沿距原点16.2cm，（1）计算化合物A的Rf。（2）在相同的薄层色谱展开系统中，溶剂前沿距原点14.3cm，化合物A的斑点应在此薄板何处？ 例2：样品和标准品经过薄层分离后，样品斑点中心距原点9.0cm，标准品斑点中心距离原点7.5cm，展开剂前沿距原点15cm，试求样品及标准品的Rf值和Rr值？ 二、吸附剂与展开剂 (一）吸附剂 硅胶：硅胶H、硅胶G、硅胶HF254 氧化铝：可分为中性（pH7.5)、碱性（pH9.0）和酸（pH4.0） （二）展开剂 按极性由弱到强： 石油醚环己烷二硫化碳四氯化碳三氯乙烷苯甲苯二氯甲烷乙醚氯仿乙酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇吡啶酸水 （三）吸附剂与展开剂的选择 展开剂的选择： 根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性 四、操作方法 定性分析——18cm×6cm 制备纯品——20cm×20cm 展开：层析缸，预饱和，防止边缘效应，浸入展开剂深度0.5?1.0cm，展开至整板3/4距离,标记。 四、定性和定量分析 薄层扫描法 薄层扫描法是用一定强度光束照射薄层上的斑点，用仪器测量照射前后光束强度的变化，从而求得物质含量的方法。 检测方法 吸收测定法和荧光测定法 测量方法 投射法和反射法 扫描方式 单波长和双波长 定量方法 外标两点法定量 第四节 纸色谱法 一、基本原理 以纸做载体的色谱法