生化分离实验题目及答案.docVIP

1. 在咖啡因的提取实验中，为什么加CaO? 答:吸取水分，防止咖啡因蒸汽溶于水； 中和鞣酸； 索氏提取装置有哪几部分组成？（画图） 3. 咖啡因升华过程中用到了什么？咖啡因的升华结晶应注意哪些操作？ 答：用升华装置包括：蒸发皿、电热套、漏斗（滤纸、牙签、棉花） 注意：1.要控制好温度，始终都需用小火间接加热，如温度太高，会使产物发黄。 2. 漏斗颈部棉花松紧适宜。 3.滤纸的孔数适宜，也不能将滤纸放反了。 4.若漏斗上有水蒸气应用滤纸擦干 4. 茶叶咖啡因的提取实验中，浓缩去除乙醇的过程中用到了哪些设备？ 答：旋转蒸发器、水浴锅、循环水式真空泵等 5.动物脏器DNA提取实验中，蛋白质是如何去除的？ 答：用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质， 6.动物脏器DNA提取实验中,如何鉴定DNA的纯度？ 答： DNA在紫外区有强吸收，最大吸收波长为260nm，而Pro 在280nm处有强吸收， 若其中含有Pro，则A260 /A280小于1.6，若含有RNA，则大于2.0，纯的DNA溶 液为1.8左右，据此可判断DNA纯度。 7.动物脏器DNA提取实验中,RNA是怎样去除的？ 答：在浓NaCl溶液（1～2mol/L）中，DNA核蛋白的溶解度很大，RNA核蛋白的溶解 度很小；而在稀NaCl溶液（0.14mol/L）中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核 蛋白的溶解度很大。将提取的细胞核物质先溶解与浓NaCl溶液中充分搅拌一定时 间后，加水稀释，降低DNA溶解度使DNA沉淀出来，倒去上清即除去RNA。 8.动物脏器DNA提取实验中,氯仿—异戊醇的作用是什么？离心后分哪几层？ 答：氯仿—异戊醇的作用使核蛋白乳化变性 分三层：上层为DNA和DNA核蛋白的水层 中间层为变性蛋白凝胶 下层为氯仿-异戊醇的有机溶剂层 9.动物脏器DNA提取实验中,为什么用0.1MNacl—柠檬酸间歇式的搅拌猪肝？ 答：与细胞等渗溶液，在搅碎时，保持细胞内外渗透压，防止细胞核破碎；间歇性搅拌 是为了避免搅碎细胞核（剪切力） 10.离子交换层析分离鸡卵粘蛋白实验（上半部），粗提过程中用哪种试剂去除杂蛋白？ 用哪种试剂沉淀得到粗黏蛋白？ 答：10%TCA去除杂蛋白 预冷丙酮沉淀黏蛋白以得粗提取物11.鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中，所用的树脂是哪种？树脂为什么预处理？如何预 处理？ 答：1.DEAE—纤维素树脂 2. ①去除交换剂中存在的杂离子 ②使其充分溶胀 3. DEAE—纤维素→碱性溶液中浸泡一定时间→洗至中性→酸性溶液中浸泡一定 时间→水洗至中性→保存在缓冲溶液中备用 补充：对于OH型：先碱洗，再洗至中性，再酸洗，再洗至中性。 对于H型：先酸洗，再洗至中性，再碱洗，再洗至中性 12.DEAE—纤维素是哪种类型离子交换剂，如何预处理DEAE—纤维素（OH型） 答：是阴离子交换剂；对于OH型：先碱洗，再洗至中性，再酸洗，再洗至中性。 13.在鸡卵黏蛋白离子交换层析提取实验中保持系统pH值稳定6.5左右用意何在？ 答：实验中用的离子层析柱，离子交换剂带正电荷，系统pH 为6.5，能使目标蛋白带 负电，能与离子交换剂结合，使得杂蛋白带正电不能与离子交换剂结合，而使目标 蛋白与杂蛋白分离。 14.简要画出离子交换层析系统中所用设备组成图? 答：恒流泵-离子交换柱-紫外检测仪-级分收集器 15.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（上半部），为什么提取液的水在 3.5左右？ 答：黏性Pro 在pH3.5不发生沉淀，能维持它的稳定性，而使杂蛋白带正电，TCA自 身带负电，能与正电的杂蛋白结合使其变性，若pH再减小，TCA变形能力降低， 而且黏蛋白稳定性破坏，即3.5pH减少了目标 pro 的变性，增加了杂蛋白变性。 16.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（下半部）PH6.5的用意何在？ 答：洗脱杂蛋白质，使目标蛋白带负电，同时杂蛋白带正电（存在少量杂蛋白带负电） 17.简述反胶团萃取甘薯中淀粉酶的实验原理? 答:表面活性剂在有机相中自发形成反胶团，其内部有稳的水池，蛋白质溶解于小水池 中，其周围有一层水膜及表面活性剂极性头的保护，使其避免与有机溶剂接触而失活。 改变pH、盐浓度等条件蛋白质又可回到水相(反萃)，实现了蛋白质的萃取分离、纯 化目的。 18.栀子黄色素提取实验中，栀子苷是如何去掉的？为什么用此方法去除? 答：D101是非极性吸附剂，在极性溶液中对溶质的吸附作用大，对栀子黄色素的吸附 能力强，改为 70%乙醇时，溶液极性变小，非极性树脂吸附乙醇而洗脱