微生物限度检查法操作规程资料.ppt

微生物限度检查法操作规程 质量检测中心 张廷滔 内容 1.定义 2.检查环境 3.微生物限度检查室的组成和要求 4.稀释液和培养基 5.供试品的保存 6.举例说明具体实验操作 本检查法中细菌及控制菌培养温度为 30℃～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为 23℃～28℃。 检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10cm2为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。 2.检查环境 检查环境 微生物限度检查环境在洁净度C级下的局部洁净度B级的单向流空气区域内进行。 3.微生物限度检查室 要求 温度：18～26℃； 相对湿度：45～65％； 压差：洁净室与外界压差≥30Pa 4.稀释液和培养基 稀释液和冲洗液 0.1%蛋白胨水溶液 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 培养基 营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基 胆盐乳糖培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基、 曙红亚甲蓝琼脂培养基、营养肉汤培养基、四硫磺酸钠亮绿培养基、胆盐硫乳琼脂培养基 6.具体检查操作（以阿莫西林分散片为例） 实验前的准备 以阿莫西林分散片为例 1.在《洁净室使用记录上》登记好阿莫西林分散片的规格、批号；准备一张微生物限度检查空白记录，填好除检验结果以及温湿度外的其他必要信息。 2.准备好相应的检查用品： 营养琼脂培养基和玫瑰红纳琼脂培养基各1瓶融化后，放入烤箱中待用 100mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 1瓶 9ml/管的pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液4支 0.1%蛋白胨水溶液（500ml瓶） 滤杯 沉降菌平皿 空白平皿 -吸管、镊子、剪刀等放入不锈钢盒中经干热灭菌后待用 3.配置消毒液 0.1%洁尔灭溶液 75%乙醇 5.按空调机组上的F2”键，开启空调；通过物流通道处的按钮，开启净化工作台。 化验人员按照《进出微生物检测室更衣操作规程》进行正确的更衣。 进入更鞋室→更鞋→脱去工作服及私人衣物（只剩贴身内衣、内裤）挂在衣钩上→并将所有头发塞入发网中固定→洗手→用手肘开门进入一更。 然后取GEL溶液2～3ml，采用六步法对双手和手腕进行消毒（在30秒内保持双手完全被GEL覆盖）→用手肘开门进入C级二更（黄色地面）。 在二更更鞋，然后戴上绸帽，绸帽应包裹住全部头发；再戴上口罩，口罩必须覆盖嘴、鼻，在脑后勒紧；最后穿洁净区连体工作服，依次将左脚、右脚、左手、右手穿入（过程中应避免碰触洁净衣外表面，同时洁净衣也不得接触地面或墙面）→检查自己的着装→用手肘开门进入C级缓冲间。 在C级缓冲间，用手肘开门分别进入C级微生物限度检查室一和检查室二，带上无菌手套，再在消毒液中浸泡约30秒。 化验人员用浸泡了消毒液的无菌毛巾，擦拭净化工作台台面。 打开传递窗，将相关的检查用品依次摆放在不锈钢桌上和净化工作台上。（镊子和剪刀应插入75%酒精棉球中） 准备7个沉降菌平皿，做好标记和日期 在净化工作台上和检查室地面上摆放好沉降菌平皿。 用消毒液清洗浸泡双手，将消毒毛巾贴好，放在净化工作台台面上。 供试液的制备原则 常用的供试品制备方法 液体供试品 取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。 固体、半固体或粘稠液供试品 称取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1：10供试液。有必要时可适当加温（不应超过45℃）。 供试液的制备 先用75%酒精棉球擦拭阿莫西林分散片铝塑板。 取无菌磨口瓶一个，放入天平托盘上，按归零键归零。 取下磨口瓶，将磨口瓶瓶口过火焰数次 ,将阿莫西林分散片铝塑板放置于磨口瓶瓶口，通过挤压铝塑板将阿莫西林分散片拨于磨口瓶中，再将磨口瓶放置于天平上进行称量，共称取10g阿莫西林分散片于磨口瓶中。 称量完毕后，将磨口瓶瓶口过火焰数次 ，加入100ml的pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 ，盖上磨口瓶瓶盖，轻轻震荡混匀，作为1：10的供试液，静止5分钟，得上清液。 在供试液静止沉淀的同时准备8个无菌平皿，每2皿为一组，分别在每组的2个平皿盖上分别依次注明“0（空白）,10-1, 10-2, 10-3”。 准备3瓶胆盐乳糖培养基，分别在瓶上注明”1-/2, 1+/2, 0/2“,其中2标示当月2号，1表示当天所做的第一个样品、+：表示样品阳性，-：表示样品、0：表示阴性对照。 细菌和控制菌检查 薄膜过滤法 制备平皿 　准备2个无菌平皿，倾注营养琼脂培养基约15-20ml，半盖盖，除出去冷凝水后，盖上平皿盖待凝。 火焰喷射器在检验仪的过滤头表面灭菌3～5秒钟。