蟑螂抗菌成分的提取与分离剖析.pptVIP

蟑螂抗菌成分的提取与分离 论文内容 天然产物新药的研究 昆虫内激素 昆虫内激素是由昆虫腺体分泌的激素，对昆虫的生长发育有很大的影响。 昆虫的内分泌器官分为两大类 ①神经分泌细胞，如脑神经分泌细胞。 ②腺体内分泌器官，如咽侧体 从化学性质上可将昆虫激素分为三大类型 ①蛋白质类，包括肽类，如脑激素、滞育激素 、激脂激素等。 ②甾醇类，如蜕皮激素。 ③萜烯烯类。如保幼激素。 本课题选用蟑螂作为研究对象，利用天然产物现代分析技术提取分离，利用常见的革兰氏阳性菌——枯草芽孢杆菌，革兰氏阴性菌——大肠杆菌作为测试菌，试图发现并分离出结构新颖且活性显著的抗菌或抑菌化合物，并通过结构修饰或结构改造，产生出新型的抗生素。 初步分离 利用硅胶柱色谱进行初步分离，选用乙酸乙酯—甲醇溶剂体系，依次用100%,7:3,1:1,3:7,0 的比例进行洗脱，并用TLC（薄层色谱）追踪馏分情况，然后检测生物活性并选出有活性馏分进行结构鉴定。 HPLC分析分离 在紫外波长为254nm（紫外扫描得到），甲醇-0.5%三氟乙酸水溶液为流动相30ml/min的脱气速率，1ml/min的洗脱速率下（实验室已建立），对已得粗提物浸膏进行分析，收集并浓缩每分钟的馏分，并对每分钟的馏分进行生物活性检测，选出具有良好生物活性的馏分，进行进一步的分离纯化。 两种菌种的抗菌图 河南科技大学 研究背景及意义 研究内容 研究方法 结果与讨论 研究背景及意义 天然产物是药物研发中极具潜力的原料资源，分离纯化天然产物中具有独特生物活性的物质是中药研究的重要基础工作。不仅世界各种传统医药学中使用的药物均属于天然来源的物质，现代医学应用的化学药物中天然来源的化合物超过30%，而且还有更多的药物是以天然产物为先导化合物经过结构修饰和结构改造产生的。 药用昆虫的研究 昆虫隶属于节肢动物门昆虫纲，是动物界最大的种群，而且是天然产物中不可或缺的资源宝库，昆虫的开发和利用将给天然产物的研究注入新的活力。 昆虫在中国医疗史上扮演着重要角色。随着现代医药的发展，中医中药凸显出西医西药不可替代的价值，从天然产物中研究开发新药成为新药开发的新途径，掀起了国内外学者以寻找新的防病治病有效成分为目的，研究中医中药的高潮，从而也推动了中医中药的发展进步。 昆虫次生代谢物的研究 本课题意义 研究内容 材料及仪器 本课题选用蟑螂（cockroaches ）作为研究对象。 目前国内外对蟑螂的研究仅限于抗菌肽等大分子的抑菌活性，昆虫体内次生代谢物小分子化合物的抗菌活性鲜有报道，这也是本课题的创新点。 试验主要采用的仪器为HPLC（高效液相色谱） Waters 600E 梯度二元泵，2487紫外检测器 分析柱：4.6×150 mm C18 5 μm Sunfire柱 制备柱：10×150 mm C18 10 μm Sunfire柱 附有Waters 自动馏分收集仪 研究方法 二氯甲烷浸泡，抽滤 70%甲醇浸泡，抽滤 70%甲醇浸泡，抽滤 蟑螂干燥粉碎虫体 滤液1 滤液2 虫渣 虫渣 风干 二氯甲烷提取物 滤液3 虫渣 滤液4 虫渣 风干 70%甲醇提取物 旋蒸 冷冻 二氯甲烷浸泡，抽滤 试验流程 粗提物按照流程图提取 本实验只对70%甲醇部位浸膏做研究。 活性检测 本实验采用平板测定法测定生物活性：选用枯草芽孢杆菌（G+）和大肠杆菌（G-）作为试验菌种，采用LB培养基，青霉素，庆大霉素分别为其对照，配置样品溶液的溶剂为空白对照。 本实验具体操作为：在90mm的平板上，分别加3μl的被测样品，样品浓度固定为15 mg/ml和30mg/ml。对照抗生素浓度对应采用1mg/ml和10mg/ml。培养一晚上，测其抑菌圈大小，判断其生物活性 15mm强 10mm一般 5mm下无 结果与讨论 - 12 0.6~0.8 E.c. 16~18 10 0.6~0.8 B.s. 青霉素抑菌圈（mm） 培养t(hour) OD 细菌 青霉素抗菌试验结果 表明这是阳性对照青霉素的最佳测定条件 试验阳性对照 —— —— ++ —— G- —— —— +++ + G+ 70%甲醇 硫酸庆大霉素 青霉素 70%甲醇粗提物 70%甲醇粗提物的抗菌试验 +++表示很强抑菌活性（≥15mm） ++表示有一般抑菌活性（10-15mm） +表示有抑菌活性（5-10mm） ——表示无抑菌活性 抑菌活性 大肠杆菌 枯草孢芽杆菌 * * * *