研细胞培养基本技术和方法剖析.pptVIP

* * 第四章 细胞培养的基本技术和方法（I） 一、原代取材的基本要求 1.无菌 2.取材器械要锋利 3.及时培养：组织块1cm，尽快培养；若延时，将组织置于培养基内置冰浴或4℃冰箱24h 4.剔除与培养细胞无关的成分 5.营养充分：最好用胎牛血清，10－20％浓度 6.注意保存原代组织的相关材料及信息 二、组织材料的分离 （一）细胞悬液的分离 1.材料为血液、羊水、腹水、胸水等 2.500－1000r/min,低速离心5－10min （二）组织块的分离方法 1.机械分散法 （1）适用于纤维成分少的组织，如脑、肿瘤等 （2）多采用注射器针芯挤压法 3－5mm大小组织块 80目孔径不锈钢筛网 150目筛网 收集细胞悬液，接种培养 2.剪切分离法：将组织剪成1mm 左右培养 3 3.消化分离法： 三、原代细胞培养技术 原代培养：又叫初代培养，是从供体进行细胞 分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。 （一）组织块培养法 是将组织剪切成小块后，接种于培养瓶 进行培养。 1mm大小组织块 均匀摆放在培养瓶壁上，25ml培养瓶以20－30块为宜 翻转培养瓶，使瓶底朝上，加入少量培养基，置37℃温箱 2－4h后，将培养瓶翻转平放，静置培养 注意事项： 1.轻拿轻放，避免组织块漂起 2.第1－2天特别注意观察是否有污染 3.3－5天后换液一次 （二）消化培养法 1.按消化分离法获取细胞