四细胞融合和单克隆抗体剖析.pptVIP

（2） 颗粒性（细胞）抗原（不需用佐剂）可用5×106~2×107细胞，作皮下或腹腔注射； 2~3周后重复一次；再待2~3周后用同样剂量细胞或半量细胞静脉注射，3~4天后取脾融合。为挑选免疫反应较好的动物进行融合，第二次免疫后10天左右应从尾部取血，检查抗体滴度。 常规免疫法 脾细胞的制备 (1)引颈处死小鼠，用酒精消毒体表； (2)无菌条件下取出脾脏，剃除结缔组织和脂肪，用5ml无血清培养液冲洗一次； (3)把脾脏置于已消毒的90一100目不锈钢网或尼龙纱网中； (4)在脾中部切开一小口，用注射器芯从一端轻轻压挤，再用无血清培养液冲洗，令细胞通过纱网，收集入平皿中，或用注射器向脾脏内注入3ml无血清培养 液，反复抽吸数次方法获取细胞，再制成细胞悬液亦可； (5)把细胞悬液注入50ml离心管中，加l0一20ml培养液：轻轻吹打数次，室温中 置5分钟； (6)离心(800一1000转／分)计数、备用。 目前最常使用的是PEG介导的细胞融合方法，具有操作简便、快速省时且融合效果好等优点。50%PEG(1000-4000），pH8.0，38℃,1min。 2、细胞融合 配制所需溶液 RPMI 1640（DMEM）培养液 完全培养液 在80 mL不完全培养液中加入56℃灭活30min的无菌胎牛血清20 mL即成，4℃保存。 无血清培养液 将1