小鼠抗猪囊尾蚴单链噬菌体抗体库构建.doc

小鼠抗猪囊尾蚴单链噬菌体抗体库的构建  前  言  猪囊尾蚴病 cysticerosis cellulosae 是由猪带绦虫 Tania solium 的幼虫引起的一种  人畜共患寄生虫病  流行范围广  不仅严重危害人体健康  还给养猪业带来巨大的经济损  失 据调查 我国人群猪带绦虫感染率达 0.112% 囊虫感染虽无准确数字 且囊虫病患者  明显少于绦虫病患者 但危害严重 碍 肢体瘫痪 甚至昏迷死亡  其中脑囊虫病患者尤甚  严重者可引起失明  精神障  目前对此病的最佳防治手段应该是药物治疗和疫苗预防相结合  然而  由于猪囊虫寄  生部位特殊  生活史复杂  抗原成分众多  且变异发生迅速  使得防治工作的难度仍然是  有增无减  尤其是人囊虫病的诊断  治疗和预防  在寄生虫学研究领域  诊断和疫苗是两  大热点  随着分子生物学及基因工程技术的发展  国内外对寄生虫疫苗研究集中在分子疫  苗的制备  但目前对许多寄生虫的抗原表位  蛋白分子免疫识别以及抗原抗体的相互作用  尚缺乏足够的了解 没有突破性的进展 因此 在研究手段上需要人们另辟蹊径 自 1975  年单克隆抗体技术问世以来 特别是在寄生虫研究中的应用  使得猪囊虫的免疫诊断和预  防都取得了重大的进展  但由于其操作复杂  效率低等缺点  已无法满足现实需求  随着  分子生物学和细胞生物学技术的研究进展  抗体的研究已进入基因工程抗体时代  九十年  初抗体库技术特别是噬菌体抗体库技术的问世  成为抗体革命中的突破性进展  从此利用  噬菌体表面展示技术制备人源化  多功能化  高亲和力的特异性抗体成为可能  噬菌体抗  体库技术是用 PCR 扩增出抗体的全套可变区基因 将抗体分子 DNA 片段如 Fab 或单链抗  体 ScFv 与噬菌体外壳蛋白基因 P  或 P  连接 使融合蛋白表达于噬菌体颗粒的表面 就  形成了噬菌体抗体库 经过 吸附  洗脱一扩增”过程富集筛选特异性抗体 这一技术将  抗体基因型与表型联系在一起,将抗体识别抗原的能力和噬菌体扩增的能力结合在一起 通  过免疫亲和筛选  直接得到特异的抗体基因  可进一步进行基因工程改造  因此噬菌体抗  体库技术可以被认为是体内抗体生成过程的模拟  首先建立足够多样性的抗体库  然后通  过免疫亲和筛选即可能得到针对任何抗原的抗体  该技术省时省力  无需经过杂交瘤甚至  不经过免疫  在制备人抗体方面显示无可比拟的优越性  解决了传统的人杂交瘤系统低效  的难题  利用噬菌体抗体库技术还可能产生体内不存在的新的特异抗体  该技术将抗体的  基因在原核或真核系统表达 可大规模制备抗体 1997 年澳大利亚的 FOIey 小组[3]用噬菌  体表面展示技术从鼠源性  抗疟疾疫苗的侯选分子  单链可变区片段  ScFv 测序获得了  至少 4 个不同的 ScFv 基因序列 为进一步研究 AMA 1 的结构和功能奠定了基础 1  目前 新疆农业大学硕士研究生论文 Foley 小组正在实验这些抗体片段在小鼠体内外对疟原虫感染中的保护作用 并认为人源  化的抗体能通过基因抗体工程菌大量廉价生产 可用于今后疟疾的治疗和诊断 人们预测  噬菌体抗体库技术将逐步取代传统的杂交瘤技术 生物技术领域极具应用前景 2  成为生产人单克隆抗体的主要手段  在 小鼠抗猪囊尾蚴单链噬菌体抗体库的构建 文献综述 噬菌体抗体库技术及其研究进展  随着分子生物学和细胞生物学技术的发展 抗体的研究已进入基因工程抗体时代  九  十年代初抗体库技术特别是噬菌体抗体库技术的问世  成为抗体制备技术的革命性突破  标志着利用噬菌体表面展示技术制备人源化  多功能化  高亲和力特异性抗体成为可能  噬菌体抗体库技术是用 PCR 扩增出抗体的全套可变区基因  将抗体分子 DNA 片段如 Fab  或单链抗体 ScFv 与噬菌体外壳蛋白基因 P  或 PV 连接  使融合蛋白表达于噬菌体颗粒  的表面  就形成了噬菌体抗体库  经过  吸附  洗脱一扩增  过程富集筛选特异性抗体  这一技术将抗体基因型与表型联系在一起 将其识别抗原的能力和噬菌体的可扩增性统一  起来 较好的模拟了体内抗体产生的过程  成为一种高效的筛选体系  本文就应用丝状噬  菌体展示系统构建噬菌体抗体库的原理  方法及其研究进展进行综述  一  噬菌体展示技术系统 用于蛋白质展示的系统主要有 3 种 1.噬菌体展示系统 2.噬粒展示系统 3