S3实验三胡萝卜离体根培养(理论).docVIP

实验三 胡萝卜离体根的培养一污染 ◆组织培养中经常遇到的问题 ◆影响试管苗的质量，关系快繁的成败 1、污染的来源及危害 来源： ◆材料表面消毒不彻底 ◆无菌操作中外界环境进入培养容器造成 危害： ◆初代培养失败、增殖速度慢、生长速度慢、玻璃化加剧 ◆成活率低、病毒和病菌的扩散、培养物的遗传变异 2、污染的种类及其防止 种类： A、细菌性污染 ◆培养基某一位置或培养材料周围出现黏液状物或浑浊的水渍状痕，有时呈发酵状泡沫。接种后1 ~ 2天可见。 ◆材料、培养基灭菌不彻底 ◆操作不当 B、真菌性污染 ◆主要是霉菌污染 ◆培养基污染部位发霉，接种3 ~ 5或更长时间可见 ◆颜色有黝黑、白、黄等 原因： ◆周围环境和空气污染造成 ◆接种过程中，操作不慎造成 防止： ◆选择植物材料：品种、部位、大小、时期 ◆严格消毒灭菌 ◆合理安排繁殖程序 ◆规范操作，控制环境条件 二外植体褐变 1、原因 细胞内的酚类化合物经多酚氧化物氧化成褐色的醌类物质和水，醌类物质与酪氨酸酶发生作用使外植体蛋白聚合，导致外植体生长停顿，直至死亡。 2、影响褐变的因素 ◆基因型：木本植物比草本植物更易引起褐变 ◆外植体的生理状态 ◆培养基 ◆温度和光照：光能促进植物组织中酚的氧化 ◆外植体大小：材料太小易褐变 ◆外植体的受伤程度 ◆材料转移时间 ◆灭菌的化学药品 3、克服措施 ◆选择适宜的外植体和培养条件： 适宜的温度和全黑暗条件可减少褐变 ◆连续转移 ◆加入抗氧剂：如Cu 三试管苗的玻璃化 即试管苗的茎、叶变成透明水浸状，生长畸形，增殖系数明显下降，难以诱导生根，即使生根，其根系质量极差，移栽成活率极低。 1、形态解剖学和生理生化特点 A、形态解剖学特点 ◆植株矮小肿胀，呈半透明状 ◆茎短而粗，几乎不节间，茎尖顶端分生组织相对较小 ◆分生组织性时期短 ◆叶片皱缩并纵向卷曲，脆弱易破碎，不具有栅栏组织，仅有海绵组织，叶肉细胞间隙大，玻璃苗叶表缺少角质层蜡质或蜡质发育不全无功能性气孔 ◆茎叶液泡程度高，胞质较稀，核变小，细胞无明显长轴 ◆细胞壁区域有空洞，壁结构不完整 B、生理生化特点 ◆体内含水量与可溶性糖含量高 ◆干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素含量低 ◆水分代谢有障碍，细胞肿胀，半透明 ◆吸收养分和光合功能不全，分化能力降低 ◆不适宜继代培养 ◆移栽成活率低 2、发生机理 到目前为止，看法仍无统一。 一种观点： 乙烯过饱和，引起解氨酶活性降低，阻碍木质化进程，从而降低了细胞壁的压力使水分大量进入的结果 另一种观点： 磷酸戊糖代谢途径导致 CO2在容器中的浓度大增，抑制了磷酸戊糖代谢途径，核酸、纤维素合成减少。 3、控制和克服的措施 ◆使用透气性好的封口材料 ◆选择合适的激素种类和浓度，注意生长素与分裂素的配合 ◆采用固体培养，适当增加琼脂含量，降低水势 ◆高温季节要有降温措施 ◆改变供氮形态 ◆培养基中适当添加间笨三酚或根皮苷、青霉素G钾、活性炭、聚乙烯醇等 ◆适当延长光照时间，增加自然光照，提高光照强度 ◆适当提高无机盐含量 四试管苗的移栽成活 1、试管苗的特点 ◆无根系或根系不发达◆无根毛或少根毛◆输导组织不连通 ◆吸水能力差◆表皮蜡质少◆易于失水萎焉◆抗性差，易感染病死亡 2、提高成活率措施 ◆试管内到试管外◆异养到自养 ◆无菌条件到有菌条件◆恒温、高湿、弱光到变温、低湿、强光、变化剧烈 注重： 炼苗过程、移栽后的管理 7