2015-2016学年 4.3《酵母细胞的固定化》课件.pptVIP

* . . . * . . . * . . . * . . . * . . . 专题4 酶的研究与应用 课题3 酵母细胞的固定化 1．说出固定化酶和固定化细胞的作用和原理；2．尝试制备固定化酵母细胞，并利用固定化 酵母细胞进行酒精发酵； 3．知道固定化酶的实例。 通过以“酶是用来干什么的”为背景材料，回顾必修一有关酶的知识，设计问题，导入新课。首先讲解固定化酶的应用实例，熟悉固定化酶的反应柱示意图，了解固定化酶的优点，引出固定化细胞技术，步步深入，最后以酵母细胞为例讲解细胞的固定化过程。 在讲解固定化酶的应用实例中，已果糖的制备为切入点讲解固定化酶反应柱，固定化细胞技术是本节的重难点，其中以熟悉的酵母细胞为例来学习实验的过程。先讲解酵母细胞的活化，及加热使海藻酸钠溶化并注意控制海藻酸钠浓度，然后制备凝胶珠及其检测。在教学中辅以视频播放，更生动的学习整个实验过程。 酶是用来干什么的 1. 酶的概念、特性、影响酶活性的因素、应用。 2.加酶洗衣粉中常用的酶制剂有哪些？这些酶能直接加入洗衣粉吗？ 3.酶制剂的使用有哪些优缺点？ 一、固定化酶的应用实例 1.利用固定化酶技术生产高果糖浆的实例 （1）高果糖浆的生产需要葡萄糖异构酶 （2）葡萄糖异构酶的优点 稳定性好、可以持续发挥作用 在生产中直接使用酶有什么缺点？ 2.固定化酶的反应柱示意图 3.固定化酶在生产实践中的优点 反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本，提高了果糖的产量和质量。 二、固定化细胞技术 1.将酶或细胞固定化的方法 将酶（或细胞）包埋在细微网格里 将酶（或细胞）相互连接起来 将酶（或细胞）吸附在载体表面上 2.固定化酶和固定化细胞的联系与区别 联系： 区别： 1）固定化细胞技术操作容易，成本低,容易回收； 2）固定化细胞技术对酶活性影响更小； 3）固定化细胞固定的一系列酶； 4）由于大分子难以通过细胞膜，因此固定化细 胞的应用有一定的限制。 应用相同，都能催化某些反应 3.固定化酶和固定化细胞常用的载体材料 明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等，其共同的特点是不溶于水的多孔性载体。 一、制备固定化酵母细胞 实验操作 1.酵母细胞的活化 2.配制物质的量浓度为0.05mol/L的CaCl2 3.配制海藻酸钠的溶液 4.海藻酸钠溶液与酵母细胞混合 5.固定化酵母细胞 二、用固定化酵母细胞发酵 1.将固定化的酵母细胞（凝胶珠）用蒸馏水冲洗2到3次 2.将150ml质量分数为10%的葡萄糖溶液转移到200ml的 锥形瓶,再加入固定好的酵母细胞,置于25摄氏度下 发酵24h。 在缺水的状态下，微生物会处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。酵母细胞所需要的活化时间较短，一般需要0.5～1 h，教师需要提前做好准备。此外，酵母细胞活化时体积会变大，因此活化前应该选择体积足够大的容器，以避免酵母细胞的活化液溢出容器外。 1.酵母细胞的活化 2.加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环，涉及到实验的 成败，教师一定要提醒学生按照教材的提示进行操作。海藻 酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量。如果海藻酸钠浓度过 高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包 埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。 3.刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形 成稳定的结构。检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下 列方法。一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤 压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶 珠的制作成功。二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝 胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的。 类型 优点 不足 直接使用酶 催化效率高；低能耗；低污染等。 易失活；难回收，成本高；酶混合在产物中可能影响产品质量。 固定化酶 既能与反应物接触，又能与反应物分离；可重复利用 一种酶只能催化一种或一类反应，而生产中很多产物需一系列酶促反应才能得到。 固定化细胞 成本低；操作更容易 大分子物质难以自由通过细胞膜使应用受到某些限制。 1.直接使用酶、使用固定化酶和使用固定化细胞催 化反应，各有哪些优点与不足？ 2.固定化酶和固定化细胞技术有哪些？各有什么优 缺点？固定化细胞常用的载体有哪些？ 有包埋法、化学结合法和物理吸附法。 固定化酶分子小更适合采用化学结合法和物理吸附法，用包 埋法却容易从包埋材料中漏出。固定化细胞因细胞大不易被 吸附或结合适宜采用包埋法。 常用载体：明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯 酰胺等。 3.固定化