紫外可见吸收光谱法介绍.pptVIP

* 假设样品，I0为照射到样品上的一定波长的光强度（称为入射光强度），It为光通过样品之后的光强度。通过测量光强度的减弱来得出物质量，这种方法被称为分光光度法。那么，物质为何对光有选择性的吸收？光强度的减弱如何与物质的浓度联系起来？怎样测量光的减弱？ * 各种颜色光波长范围是不同的： 黄光（580-600nm）蓝光（450-480nm） * 1.电子相对于原子核的运动--电子能级; 2.原子核在其平衡位置附近的相对振动--振动能级; 3.分子本身绕其重心的转动--转动能级. * 单组份定量的常用方法有目视比色法、比较法和直读法、标准曲线法、示差光度法等。 * Lambert-Beer定律的适用性 适用条件： 1. 待测物为均一的稀溶液、气体等，无溶质、溶剂及悬浊物引起的散射； 2. 入射光为单色平行光。 局限性： 样品吸光度 A 与光程 l总是成正比。但当l 一定时，A 与 c 并不总是成正比，即偏离 L-B 定律！这种偏离由仪器和样品性质决定。 A=εlc * 样品性质影响 待测物高浓度--吸收质点间隔变小—质点间相互作用—对特定辐射的吸收能力发生变化--? 变化； 试液中各组份的相互作用，如缔合、离解、光化反应、异构化、配体数目改变等，会引起待测组份吸收谱线的变化； 溶剂的影响：对待测物吸收峰强度及位置产生影响； 胶体、乳状液或悬浮液对光的散射损失； 在高浓度的电解质溶液中，折射指数发生变化; 待测样品在测定波长下发荧光或磷光； * 亚甲基蓝阳离子水溶液的吸收光谱 ?x104 ?/nm a. 6.36×10-6 mol/L b. 1.27×10-4 mol/L c. 5.97×10-4 mol/L 亚甲蓝阳离子 单体 ?max= 660 nm 二聚体 ?max= 610 nm * 仪器因素（稳定性和非单色光） 假设入射光由测量波长?x和干扰?i波长组成，溶液在?x和?i 的吸光度分别为： 当?x=?i 时，有A=?xlc, 符合L-B定律； 当?x??i 时，则吸光度与浓度是非线性的。二者差别越大，偏离L-B越大。 * 测定波长的选择 * 显色反应及显色条件的选择 显色反应 将带测组分转变为在紫外可见区具有较强吸收物质的反应。 显色剂的选择原则: 灵敏度高，选择性好，组成恒定、配合物稳定、显色剂吸收波长与配合物吸收波长相差大（??max60 nm），重现性好等等。 * 显色剂 无机（SCN-；MoO42-；H2O2） 有机 OO型： 磺基水杨酸 NN型： ON型： PAR S型: 双硫腙 OH COOH SO 3 H N N N N N O H OH N H N H N S N * 显色条件（1） 显色剂用量 配位数与显色剂用量有关；在形成逐级配合物时，其用量更要严格控制。通常是固定其它反应条件：cM和pH等，改变cR来获得最佳浓度范围: * 显色条件（2） 显色反应pH 配位数和水解等与 pH 有关，通过实验确定 pH1pHpH2 * 显色条件（3） 确定显色温度及显色时间 如存在其它影响条件，也应采用相同的实验方法确定最适条件。 T1(℃) T2(℃) t(min) A * 吸光度测量条件的选择 入射光波长的选择 参比溶液的选择 吸光度读数范围的选择 * 测定波长的选择 * 入射光波长的选择 一般是选择MR吸收最灵敏的?max(MR)的单色光作为入射光。 吸收光谱曲线 A ? MR ?max 选择波长的原则： “吸收最大，干扰最小” NR 〖图例〗欲测定溶液中的MR，应选入射波长?？ ?测 * 参比溶液的选择 溶剂参比：试样组成简单、共存组份少（基体干扰少）、显色剂不吸收时，直接采用溶剂（多为蒸馏水）为参比； 试剂参比：当显色剂或其它试剂在测定波长处有吸收时，采用试剂作参比（不加待测物）； 试样参比：如试样基体在测定波长处有吸收，但不与显色剂反应时，可以试样作参比（不加显色剂）。 平行操作溶液参比：用不含被测组分的试样，在相同条件下与被测组分进行同样的处理，然后做为参比。 * 100 80 60 40 20 0 T% ?c1 ?c2 ?c3 ?T ?T ?T-透光率读数误差 c ?c1 c1 ?c2 c2 ?c3 c3 吸光度读数范围的选择 光度计的读数误差一般为0.2～2％(ΔT),由于T与浓度c不是线性关系，故不同浓度时的ΔT引起的误差不同。 * 吸光度读数范围的选择 10 8 6 4 2 0 20 40 60 80 0.7 0.4 0.2 0.1 A T% Er A=0.434 当T＝36.8％， A＝0.434， Er最小 实际工作中(Er 5%)， T在10～70％，