ALigation-IndependentCloningTobaccoRattleVirusVector摘要.ppt

然后，作者又想这两个等位基因之间会不会有什么关系呢？功能是否能互补呢？ 又做了些的实验 图A是空载体对照植株的花 图B C 是均沉默了NbMADS4-1基因，但是B没有沉默NbMADS4-2基因，C又同时沉默了NbMADS4-2基因 表现为花萼片扩大5倍大小， 图D E是均沉默了NbMADS4-2基因，但是E没有沉默NbMADS4-2基因，D又同时沉默了NbMADS4-2基因 也表现为花萼片扩大5倍大小 可以得出的结论是缺少这两个基因的任意一个基因均不能使花器官正常发育 同时 作者又利用半定量分析，从基因的表达水平上进行验证 图例最上方是循环数，左侧均为空载体对照植株，右侧是沉默了的植株，1是看家基因，在对照植株里的表达和沉默植株里的表达没有表现出差异 2.沉默NbMADS4-1，该基因含量显然下降 3.沉默NbMADS4-2，该基因含量显然下降 4.沉默NbMADS4-1，看NbMADS4-2的变化，没有变化 5.沉默NbMADS4-2，看NbMADS4-1的变化，没有变化 6 7 8.NbMADS4-1、2同源的基因家族含量在对照植株和沉默植株中，含量无变化差异 这些条带比较分析，表明，单独沉默NbMADS4的一个基因，不会对基因家族的其他基因表达产生影响 进而更加说明了NbMADS4-1，2功能的非互补性，两者对花器官的正常表达，缺一不可 最后，作者探索了NbMADS4-1，2在烟草植株中的表达位置 最终得出的结论就是NbMADS4-1，2只在花发育器官中表达 总之，NbMADS4-1和NbMADS4-2表现为非冗余性，功能非互补型，对花器官的正常发育，缺一不可，且只在花发育器官中表达 到此，文章的第二个目的也证明完毕了。 Company Logo LOGO A Ligation-Independent Cloning Tobacco Rattle VirusVector for High-Throughput Virus-Induced GeneSilencing Identifies Roles for NbMADS4-1 and -2 inFloral Development 不依赖连接反映的 载体：烟草脆裂病毒 病毒诱导的基因沉默 文章讲述框架 病毒诱导的基因沉默（VIGS） 大体内容 载体高效表达的验证性实验 基因沉默效果 沉默基因含量 NbMADS4-1 NbMADS4-2 基因互作关系 基因表达位置 基因主要功能 引自：病毒诱导的基因沉默技术及其在植物中的研究进展 载体构建---?克隆目的基因： 引自：不依赖于连接反应克隆(LIC)的技术进展 插入片段和载体（单酶切过） T4DNA聚合酶 10-15bp粘性末端 退火互补 重组子（含空缺或突起） 大肠杆菌修复系统 正确的重组子 实验流程 验证 分析 XbalⅠ、Xmal Ⅰ、pts Ⅰ 消化 筛选阳性克隆 结果分析-----载体高效表达的验证实验 沉默PDS基因 导致光漂白现象 表达量 提升 结论：可以插入很多基因片段、沉默效率高 结果分析-----载体高效表达的验证实验 核糖体 微管、微丝 热激蛋白 泛素化蛋白 细胞分裂素活化蛋白激酶 还原酶 醛缩酶 载体高效表达的验证实验 结论：TRV-LIC载体的高效性 文章讲述框架 病毒诱导的基因沉默（VIGS） 大体内容 载体高效表达的验证性实验 基因沉默效果 沉默基因含量 NbMADS4-1 NbMADS4-2 基因互作关系 基因表达位置 基因主要功能 NbMADS4-1和NbMADS4-2功能验证 A、丛生状 失去顶端优势 B、野生型花托形成管状 C D E、花托大 小是对照五倍 F G、雌蕊 雄蕊都成叶状 NbMADS4-1和NbMADS4-2功能验证 A、烟草花萼托表层微观结构 B、沉默花托表层微观结构 C、野生烟草叶片微观结构 结论：MADS4-1,2与花器官的发育有关 NbMADS4-1和NbMADS4-2冗余性 A、对照 B C、 沉默NbMADS4-1 D E、 沉默NbMADS4-2 NbMADS4-1和NbMADS4-2冗余性 2.沉默NbMADS4-1 3.沉默NbMADS4-2 4.沉默NbMADS4-1 NbMADS4-2的变化 5.沉默NbMADS4-2 NbMADS4-1的变化 6 7 8. NbMADS4-1、2