靶向不同肿瘤基因的shRNA瞬时表达载体的构建和联合抗肿瘤活性的研究.pdfVIP

中国医学科学院博上论文 中文摘要 MEUERKl／2和Ras／P13l淞kt通路的阻遏作用。 细胞核因子NF．r,B是一种重要的核转录因子，其过表达和活化与癌症的发 的下调可以诱导细胞对VCR的化疗敏感性。我们检测了不同处理对NF．r,B通路 被整体下调，并且被抑制的程度大于其它处理组。 表皮生长因子受体(EGFR)参与Ras信号通路的活性调节及细胞对VCR Blot检测 作用的响应，在HepG2中表达组成型的磷酸化EGFR。Western 与VCR联合处理协同下调了EGFR的表达，N．Ras的表达抑制减弱了细胞响应 VCR处理时对EGFR的活化。 三、pCSHl．shNR联合VCR对HepG2细胞周期分布的影响 可以引起G2／M期阻滞，结果说明VCR引起的细胞周期阻滞是剂量依赖性的。 期或G2／M期阻滞。 Western blot检测细胞周期蛋白(Cyclin)和依赖细胞周期蛋白的蛋白激酶 理都下调了cyclin 的下调作用显著提高。此外，pCSHl一shNR可以逆转VCR引起的cyclinE和cyclin 与VCR联合处理使Cyclins和Cdks的整体活性水平趋于下降。 Western 3 中国医学科学院博士论文 中文摘要 使Rb磷酸化水平略有下调，E2F．1表达略有下降；VCR使Rb磷酸化水平大幅 对照组，但也显著低于VCR组，联合组的E2F．1表达下降最多。结果说明 用。 四、pCSHl．shNR联合VCR对HepG2细胞凋亡的诱导作用 协同诱导HepG2细胞凋亡。 Western 强了VCR对HepG2细胞的凋亡诱导作用。 五、pCSHl．shNR联合VCR诱导细胞衰老的作用 18．76％。结果说明pCSHl．shNR联合VCR诱导细胞衰老的能力更强。 六、pCSHl．shN欺于VCR诱导MDRl基因表达的影响 有关，而gas癌基因可以调控MDRl基因的表达。WesternBlot检测结果显示， 于VCR处理组。 的抑制效果，细胞凋亡率增多，细胞表面的EGFR的表达和活性都降低，细胞内 4 中国医学科学院博士论文 中文摘要 扰技术与化疗药物联合应用于肝癌治疗具有好的疗效。 MDM2的过表达可以抑制p53的功能，促进肿瘤形成。Pinl被认为是肿瘤 发生的催化分子，在原癌基因信号转换中是一个不可缺少的翻译者和扩大者。本 表达载体，并研究其抗肿瘤活性。 一、靶向MDM2和Pinl的shRNA表达载体的构建 采用本室已证明可以有效抑制MDM2表达的RNA干扰序列，以及文献报道 中已证明可以有效抑制Pinl表达的RNA干扰序列，将这丽段序列构建到已有的 多基因shRNA表达载体pCSHl．1中，新构建的载体命名为pCSHl．shPM。 二、pCSHl．shPM对靶蛋白表达的影响 blot检测显示， ；实验选择人的成纤维肉瘤HTl080细胞进行研究。Western 的表达，也可以使得MDM2的表达有所下降。转染pCSHl．shPM可以同时有效 组，说明抑制Pinl的表达可能下调MDM2的表达。进一步实验证明，在低表达 在HTl080细胞中抑制Pinl的表达确实可以下调MDM2的表达。 三、pCSHl．shPM对细胞生长的影响 抑制MDM2和Pinl的表达更有效地抑制了HTl080细胞的生长。 四、pCSHl．shPM对细胞运动能力的影响 采用划痕实验检测不同处理对细胞运动能力的影响。结果表明，转染 动能力，各个处理组间无差异，说明共同抑制Pinl和MDM2表达没有加强对细 胞运动能力的抑制。 5 中国医学科学院博上论文 中文摘要 初步研