毕赤酵母不同启动子的作用特点和在HPV16+L1表达中的应用.pdfVIP

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2016-06-30 发布于安徽
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毕赤酵母不同启动子的作用特点和在HPV16+L1表达中的应用.pdf

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4．1 前言……………………………………………………………………………………………………．33 4．2实验材料与方法………………………………………………………………33 4．2．1 实验材料………………………………………………………………．33 4．2．2实验方法………………………………………………………………．34 4．3实验结果与讨论………………………………………………………………41 4．3．1 PCR扩增HPVl6 LI(M)基因结果……………………………………41 4。3．2重组质粒酶切鉴定……………………………………………………．42 L1在毕赤酵母中 4．3．3重组质粒pPinkAOXl-HPVl6LI(M)／TEFl．HPVl6 的表达…………………………………………………………………………．．43 L1 中的表达………………………………………………………………………………………………．44 4．3．5 L1在毕赤酵母重组菌重组质粒pHanAOXl．HPVl6 6L1中的表达…………………………………………………46 pPinkTEFl．HPVl 4．4讨论………，…………………………………………………………………………………………．46 4．5 小结……………………………………………………………………………………………………．47 第五章用于异源蛋白表达的通用载体在毕赤酵母和汉逊酵母中的应用……息…48 5．1 前言……………………………………………………………………………………………………．48 5．2实验材料与方法………_……………………………………………………．48 5．2．1 实验材料………………………………………………………………．49 5．2．2实验方法………………………………………………………………．50 5．3实验结果与讨论………～……………………………………………………．57 5．3．1 重组质粒酶切鉴定……………………………………………………．57 5．3．2汉逊酵母rDNA及ARS元件对质粒在毕赤酵母和汉逊酵母细胞中转化效率的作用分析……………………………………………………………．59 5．3．3 下的GFP表达…………………………………………………………………61 5．3．4 MOX分别在毕赤酵母和汉逊酵母中表达GFP蛋白……：…………………63 5．3．5重组质粒pHanAOXl-HPVl6 LI(M)和pHanMOX．HPV16LI(M)在毕赤酵母和汉逊酵母中的穿梭表达…………………………………………．64 5．4讨论……………………………………………………………………………………………………．65 5．5 小结……………………………………………………………………………………………………．66 展望…………………………………………………………………………………………………………………．．68 附录…………………………………………………………………………………………………………………．．74 附录I缩写词……………………………………………………………………．．74 附录II主要试剂…………………………………………………………………．．75 附录III主要溶液的配制…………………………………………………………．．76 附录Ⅳ主要仪器…………………………………………………………………．．8l 附录V基本实验操作……………………………………………………………．．82 致谢…………………………………………………………………