遗传病基因突变分析解析.pptVIP

(5) 银染： 利用银离子可与核酸结合的特性，在甲醛作用下银离子还原为Ag，使凝胶中DNA条带显黑色。 ① 电泳完的聚丙烯酰胺凝胶用10％的酒精浸泡5分钟 。 ② 弃酒精，加入1% HNO3 3分钟，不停摇动。 ③ 弃HNO3液 ，用双蒸水清洗两次。 ④ 加入AgNO3 染液 ，染色10-20分钟。 ⑤ 用双蒸水清洗一次。 ⑥ 加入显影液，至清淅的DNA单链电泳条带出现为止。 ⑦ 弃显影液，加入10％的乙酸定影5分钟。 ⑧ 弃乙酸，在双蒸水中浸泡5分钟以上。 ⑨ 用玻璃纸包胶、干燥，观察分析及记录。 结果分析： 正常人样品目的区带有3条：一条双链扩增产物带 ，两条单链带。单链凝胶电泳时，互补单链迁移率不同，所以一般形成两条单链带。两条单链带一般在双链带后边。对显性遗传病来说，如有基因突变，则除了原正常单链带，另出现突变带。 泳道1、3、7、8是正常对照 1、用于DNA提取药品和试剂： 2、PCR反应试剂： 　10XBuffer、MgCl2、dNTPs、Taq-DNA聚合酶由所购试剂公司统一提供。 　DNA 模板：正常对照来自实验者的血液样本，基因突变样本来自角膜营养不良症患者，共计２种突变。扩增片段长度为223bp，为角膜营养不良症基因BIGH3第11外显子。 引物序列：