第九章转基因技术ppt.ppt

第八章 转基因技术 第一节 概述 （一）转基因技术的发展 ·转基因技术发展应用 20世纪70年代，医药保健卫生方面，微生物生产胰岛素、干扰素 1982年，大鼠生长素导入小鼠中，小鼠及其子代生长体型较大 农业、畜牧业、水产养殖业转基因动植物品系，培育出了一些高产、优质、抗逆性强的转基因动、植物品系 （二）转基因技术在水产动物育种中的应用 转基因技术与传统育种技术区别： 1、传统育种技术耗时长，转基因在短期内可获得所要求的遗传性状。 2、局限在生物种内个体间基因转移，血缘关系较远的生物间传统杂交基因转移难度大，转基因转移的基因不受生物体间亲缘关系限制，打破自然繁殖的种间隔离，大大提高动植物品种改良效率。 转基因技术为什么在水产动物应用较成功 1）鱼类的遗传可塑性强，如：缘缘杂交、细胞核移植实验等证据 2）鱼贝和甲壳类怀卵量大、体外受精、体外发育、胚胎操作简便和易于观察分析。 转基因育种的另一个重要应用即是将抗菌肽、溶菌酶和体液凝集素等抗病基因导入对虾体内，是解决目前对虾病原数目不断增加，抗逆性下降，种质资源退化的一个有效途径。 转基因贝研究，利用电脉冲导入法将鱼生长激素基因导入去膜的贻贝受精卵中，结果表明阳性率达到41%。 第二节 转基因技术的原理和方法 主要技术包括：外源基因的构建、外源基因有效地导入生殖细胞或胚胎干细胞、外源基因的表达与检测。 外源基因的构建： 启动子、目的基因、报告基因、转录终止信号 启动子： 是DNA分子上结合RNA聚合酶并形成转录起始复合物的区域，它和增强子（增强转录活性的结构）一起构成了基因转录的顺式作用元件。 顺式作用元件和反式作用因子相互作用，协同调节基因转录的精确性和灵活性。 分类：来自高等动物病毒基因的启动子（如SV40） 来自高等动物的启动子和增强子(如MT) 来自鱼类基因的启动子（如EF1） 目的基因 1、概念：指编码特定蛋白质的结构基因，它的表达能使转基因水产动物产生新的表型。 2、选择目的基因的原则 （1）改变受体的代谢特征 （2）改变受体对环境适应能力 3 常用目的基因 （1）生长激素基因 （2）增强抗逆性的基因（如抗冻蛋白基因、抗病性基因、珠蛋白基因） (3)报告基因：一种编码可被检测的蛋白或酶的基因。（如CAT、neo、amp、 gal 、luc 、GFP） 外源基因的导入 方法：显微注射法、精子载体法、逆转录病毒转染法、基因枪法、磷酸钙共沉淀法、脂质体融合法、激光介导法等 （一）鱼类基因转移中外源基因的导入方法 1、显微注射法 2、电穿孔法 3、精子载体法 4、基因枪法 5、逆转录病毒感染法 6、组织注射法 （二）虾类基因转移中外源基因的导入方法 基因枪法 第三节 外源基因的整合、表达与遗传 （一）、外源基因的命运 外源基因导入受精卵后经历了一系列复杂的生物学过程，一般在胚胎发育早期的受体细胞内进行大量的复制，复制以后经历部分降解、变构、多聚化和逐渐与基因组整合。 注入线性外源DNA，无论携带克隆载体与否，均可以线性单体、超环或松散环状分子以及以多聚体形式存在，其中主要以多聚体形式存在，注入环状分子则为发生变化。 外源基因整合方式： 1）有效整合 2）无效整合或沉默整合 3）毒性整合 4、极少数情况下，可发现两个拷贝呈现头对头或尾对尾的连接方式。 “循环排列线状”分子模型假说： 第一步，注入受精卵中的DNA分子迅速环化； 第二步，环化分子被酶随机切开，形成一系列循环排列的线状分子； 第三步，这些分子进行同源交换，形成相同分子的串连连接的构型。 2 外源DNA整合到染色体上的机制 外源DNA通常插入染色体的一个位点，在少数情况下插入一个以上位点，甚至插入不同染色体。 机制：一般认为，外源DNA与其染色体上整合位点之间，存在低度同源性；一种带有小卫星序列的基因常会整合到染色体的卫星序列中。整合常发生在匹配较差的序列之间的不正常交换。在外源DNA及其染色体上的插入位点的结合部，常常包含一段短的DNA序列（所谓填充序列），它明显地既不来自外源DNA，也不来自染色体。 3、外源DNA整合时间和转基因嵌合体产生 嵌合体动物是由至少两种基因组结构不相同的细胞类型构成的动物个体。 转基因嵌合体的产生是由于基因整合时染色体已复制，或者已整合的基因从一个子染色体上丢失。 4、整合效率 外源DNA复制量与注入外源基因拷贝数在一定范围内成正相关，与线性DNA分子片段长短也有关。 外源DNA整合率与受体鱼种类、注入方式、注入DNA的构型以及剂量有关 （三）同源重组 1、同源重组与基因锲入 同源重组：外源DNA可以通过同源交换整合到染色体的特定位点，只是比随机整合的频率低很多。 基因锲入：又称基因置转基因，使双