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第十八章 免疫学检测方法 免疫学检测方法 免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验方法。 第一节 检测抗原抗体的体外方法 一、抗原抗体反应的特点： 1、抗原抗体结合的特异性 特异性互补结合 共同抗原 交叉反应（非特异性反应） 2、抗原抗体结合的可逆性 Ag + Ab Ag Ab complex 抗原抗体分子结合的特点： 非共价键结合 范德华力∝分子空间构型的互补程度 静电引力 氢键 疏水性作用 抗原抗体解离 解离程度取决于抗体亲和力的大小 一、抗原抗体反应的特点： 3、抗原抗体结合的比例性 4、抗原抗体反应的阶段性与可见性 抗原、抗体在溶液中均属胶体物质，带有电荷，与水有强亲和力，为亲水胶体。在一定pH溶液中，胶体粒子所带的阴电荷和阳电荷相等，为等电点（pI）； 溶液pH pI时，羧基电离，胶体粒子带阴电荷 溶液pH pI时，羧基电离，胶体粒子带阳电荷 ①特异性结合阶段 ②可见反应阶段： 凝集现象 沉淀现象 二、抗原抗体反应的主要影响因素 电解质 温度 pH 三、抗原、抗体的制备 ㈠抗原制备 颗粒性抗原：细胞性抗原 可溶性抗原 ㈡抗体制备 多克隆抗体 单克隆抗体 四、体液免疫检测技术 ㈠传统的血清学方法 1.凝集反应 (Agglutination) 颗粒性抗原＋抗体 凝集 可溶性抗原＋相应抗体 不 凝集 可溶性抗原—无关载体＋抗体 凝集 常用载体 RBC 聚苯乙烯乳胶 活性碳 胶体金 凝集反应的类型 ①直接凝集反应： 颗粒性抗原＋相应抗体 凝集现象 玻片法 试管法 微量凝集法 ②间接凝集反应： 可溶性抗原—无关载体 ＋ 抗体 凝集 凝集反应的类型 ③间接凝集抑制试验 可溶性抗原？ 凝集现象（＋） Ag（—） ＋ ＋致敏载体 抗体 凝集现象（—） Ag（＋） ④协同凝集试验 SPA＋IgG SPA-IgG + Ag 凝集？ 2.沉淀反应 precipitation 可溶性抗原＋相应抗体 沉淀物 方法： 1、单向琼脂扩散 2、火箭电泳＝单向琼脂扩散＋电场 3、双向琼脂扩散 4、对流免疫电泳＝双向琼脂 扩散＋电泳 5、散射比浊 （ 敏感、精确、自动化） 6、速率散射比浊 3.补体结合试验complement fixation test , CFT 4.中和反应neutralization ①病毒中和试验 Ab(-) ＋ 待检血清 ＋ 病毒 ＋ 细胞 细胞感染 Ab(+) — ②毒素中和试验 待检血清 ＋ 外毒素 毒素活性作用丧失 抗链球菌溶血素“O”试验 第二节 免疫标记技术immunolabelling technique 用酶、荧光素、同位素等物质标记抗体或抗原进行抗原抗体反应，检测抗原或抗体的技术。 1 . 常用标记物质： 酶：HRP、AP 荧光素：FITC、RB200 放射性同位素 胶体金 电子致密物质: 2 . 用途： 免疫组织化学技术： 用于 抗原定位（组织切片、 细胞涂片、活体定位），在细胞或亚细胞水平上观察鉴定抗原、