03第三章_分子荧光和化学发光.ppt

§7.5 化学发光分析法简介 基于化学发光反应而建立起来的分析方法称为化学发光分析法，这种分析方法具有灵敏度高、测定线性范围宽、仪器设备简单、分析速度快且易实现自动化等优点． 化学发光的能量水平与荧光相同，引起发光的激发方式不同。 产生化学发光，反应必须产生能够发出可见光的激发产物。只有热效应可以产生足够的能量，几乎所有的化学发光反应需要氧、过氧化氢或其它强氧化剂。 一、化学发光反应的条件 任何一个化学发光反应都包括两个步骤，即化学激发和发光，如下式所示： A + B C* + D （激发） C* C + hv （发光） 间接的化学发光则按如下反应发生： A + B + C AB + C* （激发） C* C + hv （发光） 化学发光反应可以在气相、液相或固相进行，分别称为气相化学发光、液相化学发光或固相化学发光． 若化学发光在两个不同相间进行就称为异相化学发光． 化学发光反应都包括化学激发和发光两个步骤，则有 ψCL= ψCE·ψEN (1) 式中ψCL为化学发光效率；ψCE为生成激发态分子效率；ψEN为激发态发光效率，ψCL、ψCE分别定义为： 则化学发光的效率为： 一个化学反应要成为化学发光反应必须满足下面几个要求： ①化学反应要提供足够的能量生成激发态，也就是要有足够的激发能?E＊．激发能的主要来源是反应焓?Hr．大多数的化学发光反应实例中，观察到的光子能量均比?Hr大．在?Hr＜?Ｅ＊的条件下，将要由反应的活化焓?H*提供这种附加的能量．因此，必须有： ?Hr＋?H* ≥?Ｅ＊　 这是满足产生化学发光的必要条件而不是充分条件，有机发色基激发态的能量?E＊通常在0.12~0.25J·mol-1（对应于570~280nm）范围．若在整个可见紫外区（760~280nm），则?E＊处在0.092~0.25J·mol-1之间． 这个能量要求化学反应提供，在多步骤反应中，由于化学激发的瞬时性，这个能量必须由某一步骤单独提供，否则前一步反应释放的能量将因振动松弛消失在溶液中而不遗留至下一步． ②至少要有一种物质能够接受化学反应的能量生成激发态．换句话说，也就足要有足够的激发效率ψCE． 对有机分子的液相化学发光来说，从能量上看，容易生成激发态产物的常是芳香族化合物和羰基化合物． ③在反应条件下激发态分子能够以电磁辐射的形式释放能量回到基态．若ψCN很低，由式（1）可知，即使化学激发效率ψCE很高，化学发光效率ψCL也是低的．若加入适当高效率的接受体，使能量转移到接受体上而发光，就会大大提高发光效率，而在计算化学发光效率时，就得加入一项能量转移效率ψET． 二、化学发光分析的基本原理 化学发光分为快发光和慢发光．化学发光的反应过程可用发光强度与时间的关系曲线来描述（图13-13）．图中t1为化学发光峰值出现的时间，t2为化学发光峰值衰减了90%时的时间．对于快发光，t1≤1s，化学发光衰减时间即t2－t1≤5s；对于慢发光来说t2－t15s．还有一种慢发光，如图13-13b中所示，化学发光强度在一段时间基本保持不变，然后再较快的上升或下降． 图13-13 化学发光的动力学曲线 设某分析物与过量试剂作用而发光，则此时的化学发光强度与分析物浓度有如下关系 对于一级或假一级反应t时刻的化学发光强度与该时刻的分析物浓度成正比．通常在化学发光分析中采用测量峰高． 利用峰高与分析物浓度的线性关系进行定量分析． 为了提高测量的灵敏度，也可采用测量峰面积，即在一定时间间隔内对化学发光强度进行积分，得到发光强度的积分值： t1和t2若为反应过程中的某一段时间间隔，则积分值只是部分化学发光强度的积分值． 如果t1取零，t2取反应结束所需时间，得到的就是整个反应产生的总发光强度．它相当于图13-13中动力学曲线下的整个峰面积，它与分析物浓度存在线性关系．这种分析方法实质上是一种平衡法，特别适于慢的化学发光． 化学发光反应对指定的测定最好是专属的（如酶法化学发光），不需实行光学分辨或化学方法排除干扰． 如一个化学发光反应中出现不同的激发态分子，这就需要光分辨，选择测定所感兴趣的化学发光，用一个滤光片就可达到目的． 若参加反应的试剂可与各种分析物反应产生发光现象，由于化学发光光谱均相同，利用光分辨将无意义，需要采用其他方法排除干扰．例如，许多金属离子能催化鲁米