补肾活血固齿方对MC3T3E1细胞超微结构与分化影响的实验研究.pdf

中文摘要 补肾活血固齿方对MC3T3．E1细胞超微结构 及分化影响的实验研究 摘 要 牙周炎是口腔常见疾病之一，其对人体健康的伤害仅次于癌症及心脑 血管疾病。除了影响患者的咀嚼功能和颌面部美观，它还是糖尿病、肾病、 心血管疾病及新生儿早产的高危因素。牙周炎晚期牙槽骨重度吸收常常导 致牙齿缺失，如何防止牙槽骨的吸收，稳定以及重建是治疗牙周炎的关键。 中医药注重整体观念，辨证施治。我科临床上应用补肾活血固齿方治疗牙 周炎取得了良好的疗效，但其作用机制尚不清楚。碱性磷酸酶(Alkaline 被认为是骨细胞外基质成熟的早期标志。骨组织中含有80％～90％的I型 I，COLl)，它构成骨组织的蛋白框架，对维持 胶原蛋白(CollagenType 骨组织的生物力学特性和结构的完整性发挥着重要作用，是成骨细胞向基 质成熟方向分化的标志。矿化结节由胶原沉积后基质矿化形成，标志着成 骨细胞进入分化的最后阶段。本实验通过观察补肾活血固齿方对小鼠颅顶 前成骨细胞(MC3T3．E1)超微结构及分化的影响，研究该方剂成骨的作 用机制，为临床应用该药治疗牙周炎提供理论依据。 目的：连续灌胃SD大鼠补肾活血固齿方一周，提取大鼠的血液制备 胞的超微结构、ALP活性，COLI表达及矿化结节形成的影响，探讨补 肾活血固齿方在骨形成中的作用机制。 方法： 1MC3T3．E1细胞株的培养。 2依照体表面积折算成等效剂量的补肾活血固齿方灌胃大鼠，制备含 药血清；同等剂量的蒸馏水灌胃大鼠，制备无药血清作为对照组，lO％胎 牛血清作为空白对照组。 3透射电镜观察补肾活血固齿方对MC3T3．E1细胞超微结构的影响。 用浓度为10％的含药血清、无药血清、胎牛血清分别培养MC3T3．E1 细胞，培养第1d、4d、7d、14d时分别制作标本于透射电镜下对比观察 万方数据 中文摘要 MC3T3．E1细胞的超微结构。 4检测补肾活血固齿方对MC3T3．E1细胞ALP活性的影响。 10％含药血清、无药血清、胎牛血清分别培养细胞，检测第1d、4d、7d、 14d时细胞上清液中ALP活性。 对COLI表达的影响。 6观察补肾活血固齿方对MC3T3．E1细胞矿化结节形成数量的影响。 胞14d，利用茜素红染色法观察细胞矿化结节的形成并计数。 结果： 1补肾活血固齿方对MC3T3．E1细胞超微结构的影响 细胞呈成骨细胞样表型，细胞表面突起较多，核呈卵圆形，较大，核膜曲 折凹陷；胞质丰富，胞浆中糖元明显可见；粗面内质网扩张明显，网腔内 充满低电子密度絮状物；线粒体嵴韵密度较夫r细胞舍减渤鼎翔弼b而强卜一 血清组、胎牛血清组细胞的细胞器与含药血清组细胞相比较不丰富，14d 时MC3T3．E1细胞表面突起较少。 3组细胞培养上清液中ALP活性随着培养时间的延长而逐渐提高。 清组上清液ALP活性强于无药血清组、胎牛血清组，有统计学差异(尸 O．05)。 I表达的影响 镜下见含药血清组细胞的细胞质呈深棕黄色染色，无药血清组细胞的 细胞质呈浅棕黄色染色。细胞质染色强度分析采用#检验，两组染色强 度差别有统计学意义(PO．05)。 4补肾活血固齿方对MC3T3．E1细胞矿化结节形成数量的影响 3组细胞在14d时均形成矿化结节。无药血清与胎牛血清两组间矿化 万方数据 中文摘要 结节数量差别无统计学意义(P0．05)；含药血清组与无药血清组、胎 牛血清组相比，其矿化结节数量显著增多，差别有统计学意义(PO．05)。 结论：补肾活血固齿方可以促进MC3T3．E1细胞向成骨细胞样表型发 展，增加MC3T3．E1细胞ALP活性及COLI和矿化结节的形成，促进 MC3T3．E1细胞分化成熟，促进骨组织的形成。补肾活血固齿方可通过促