实验四中性粒细胞吞噬试验资料.pptVIP

实验二 中性粒细胞吞噬功能测定 吞噬细胞的吞噬作用是构成机体非特异性免疫的重要因素。吞噬细胞分为两类：一类为大吞噬细胞，即固定于组织中的巨噬细胞和血液中的单核细胞；另一类为小吞噬细胞，即血液中的中性粒细胞。它们对外来的异物有吞噬、消化和清除的功能，是机体天然防御的重要机制之一。检查吞噬细胞的吞噬率和吞噬指数可反映吞噬细胞的吞噬功能，也有助于判断动物机体的免疫机能。 【实验目的】 　　1、熟悉中性粒细胞吞噬实验的原理 和方法。 　　2、通过本实验理解机体的非特异性 免疫机制。 【实验原理】 中性粒细胞具有吞噬杀菌功能，当与颗粒性 抗原物质（如葡萄球菌等）在体内或体外试 管中混合孵育一定时间后，颗粒性抗原物质 被吞噬杀灭，根据吞噬率、吞噬指数可反映 该细胞的吞噬功能。 （一）体内法 【实验材料】 1、无菌肉汤、无菌生理盐水 2、白色葡萄球菌18～24h培养物 3、小白鼠 4、瑞氏染液，无菌注射器、载玻片等 【实验方法】 1、实验前lh注射无菌肉汤lml于小白鼠腹 腔内，诱导浆液渗出。 2、用无菌生理盐水洗下白色葡萄球菌普通 斜面l8～24h培养物，经麦氏比浊法， 配成含3亿个／ml的细菌悬液。 3、给小白鼠腹腔内注射上述菌液lml，让 其活动。 4、分别于20min、40min、60min后抽取腹 腔液涂片，瑞氏染色后镜捡。 【实验结果】 镜下随机计数100个中性粒细胞，分别计数 吞噬有细菌的中性粒细胞数和所吞噬的细 菌总数，按下述公式，计算出吞噬百分率和吞噬指数。 【实验结果】 中性粒细胞吞噬试验 【注意事项】 1、细菌浓度要合适。太高的菌液浓度，易 造成假阳性，增加结果判断的难度，浓 度不够又会造成吞噬率低，同样也会给 观察结果带来麻烦。 2、掌握好吞噬时间，以免细菌被吞噬细胞 所消化，造成吞噬率偏低。 （二）体外法 【实验材料】 　　1、白色葡萄球菌菌液（浓度6～10亿/ml) 　　2、肝素溶液（25U/ml）；甲醇，碱性美 蓝（或瑞氏）染液。 　　3、血红蛋白吸管，凹玻片，载玻片，采 血针，微量加样器，湿盒，显微镜， 恒温培养箱，75%酒精，棉签等。 【实验方法】 　　1、用微量加样器，吸取肝素20ul加入凹玻片凹孔内。 　　2、用酒精棉签消毒手指后，刺破皮肤，以血红蛋白吸 管取血40ul，立即放入盛有肝素的凹玻片凹孔内， 并充分混匀。 　　3、用微量加样器取葡萄球菌菌液20ul加入上述凹玻片 凹孔内，充分混匀。 　　4、将凹玻片置于湿盒内，30℃温箱中30min，其间每 隔10min摇匀一次。 　　5、取一小滴上述混合液，置于载玻片上，用另一载玻 片推成薄血片，待干。 　　6、滴加甲醇固定3min，水洗。 　　7、加碱性美蓝染色1～2min，水洗，印干。 　　8、置油镜下观察吞噬和未吞噬的白细胞并计数。 【实验结果】 【实验思考】 　　1、在吞噬细胞中发现细菌时，如何区别 吞噬的细菌和粘附在吞噬细胞表面的 细菌？ 　　 * *