2基因研究技术之制备与检测资料.pptVIP

思考题： 采用PCR技术扩增目的片段时，如何获得单一的特异性扩增产物？ 检测重组体克隆的菌落杂交技术 6.蛋白质/核酸杂交技术 凝胶阻滞检测 DNaseⅠ足迹检测 硫酸二甲酯（DMS）足迹检测 甲基化干扰检测 凝胶阻滞检测（Gel retardation assay） DNA迁移率变动实验（DNA mobility shift assay） 80年代初期，在体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。简单、快捷， 分离纯化特定DNA结合蛋白质 原理：DNA与蛋白的结合导致了电泳时迁移率的降低。 凝胶阻滞实验的基本原理图 放射性标记的DNA由于同一种细胞蛋白质B结合，于是在凝胶电泳中移动速度变慢，在放射自显影中呈现滞后的条带 A C B 放射自显影 * * * * 凝胶电泳 放射性标记的DNA 细胞蛋白质提取物 蛋白质与DNA结合 * * * * * * B DNA-蛋白质结合物电泳迁移缓慢 滞后带表明DNA与蛋白质结合 鉴定在特殊类型细胞的提取物中，是否存在与某一特定DNA片段结合的蛋白质分子 研究发生此种结合之精确的DNA序列的特异性。（加入超量的非标记竞争DNA） (a) (b) (c) 在凝胶阻滞实验中竞争DNA与探针DNA之间的竞争作用 （a）没有加入竞争DNA的正常的凝胶阻滞实验，探针DNA与特异蛋白质结