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第九章 聚合酶链反应及相关技术 上海交通大学 樊绮诗 聚合酶链反应于二十世纪80年代由K.Mullis建立，并和定点突变的发明者M.Smith一起荣获1993年度 诺贝尔化学奖，为生命科学领域的研究开创了崭新时代。 第一节 聚合酶链反应 聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）是DNA体外复制反应，基本原理与细胞内DNA的复制相似 一、PCR反应原理和反应过程 1.原理 DNA的体外复制包括3个步骤： 变性（denaturation）: 94?C～95?C 退火（annealing） : 40?C～70?C 延伸（extension） : 72?C 一、PCR反应原理和反应过程 变性: DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链分子作为 反应的模板 退火: 引物与模板互补结合，形成杂交链 延伸: 按照模板链的序列以互补的方式依次把dNTP加至引物的3′端，Taq DNA聚合酶使杂交双链不断延伸，直至形成新的DNA双链 一、PCR反应原理和反应过程 一、PCR反应原理和反应过程 一、PCR反应原理和反应过程 二、PCR的反应体系 1.模板（template） 基因组DNA、RNA、质粒DNA、线粒体DNA等 RNA作为模板时，须先将RNA逆转录为cDNA 模板量：1000ng、500ng、100ng、50