实验八病毒鸡胚接种与细培养资料.pptVIP

兽医微生物实验教学课件 （动物医学本科专业） * * 动物医学系 实验八 病毒鸡胚接种与培养 目的要求： 1、了解不同日龄鸡胚接种的途径和应用。2、掌握鸡新城疫病毒鸡胚尿囊腔接毒、收毒方法。 3、掌握鸡胚成纤维细胞培养和新城疫病毒接种、病变观察及收毒。实验内容：1、鸡胚的选择和接种途径：鸡胚发育正常时，可见清晰的血管和活的鸡胚，血管及其主要分支均明显，呈鲜红色，鸡胚可以活动。 卵黄囊接种：6-8日龄的鸡胚； 绒毛尿囊腔接种：9-13日龄的鸡胚； 鸡胚血管注射：12-13日龄鸡胚； 羊膜腔和脑内注射：10日龄鸡胚。 2、鸡新城疫病毒接种液或接种病料的处理；照蛋、打孔；接种。接种后的检查和收毒。 3、鸡胚成纤维细胞培养和新城疫病毒接种、病变观察及收毒。  病毒分离培养? 分离培养：动物接种——原动物/实验动物 鸡胚接种——尿囊腔、卵黄囊、尿囊膜、羊膜腔等 细胞培养——原代细胞 cpe观察空斑 二倍体细胞 基因克隆/扩增 传代细胞 组织块培养——肠管、气管环等 在无菌条件下采取9－10日龄鸡胚 ↓ 除去头(或仅除去喙和眼)、爪和内脏，并剪成块 ↓ 用Hanks液等充分冲洗 ↓ 剪将其剪成lmm大小的碎块 ↓ 加入Hanks液或其他洗液，充分冲洗 ↓ 约4倍量的0.25％胰酶，并调整pH至7.6－7.8 ↓ 37℃水浴中感作30分钟，每10分钟轻轻摇动一次 ↓ 吸弃上层胰酶溶液 ↓ 用洗液轻洗2次后 ↓ 吸管充分吹打，直至形成均匀的细胞悬液 ↓ 准备细胞计数 ↓ 单层细胞培养 鸡胚成纤维细胞培养程序： 鸡胚成纤维细胞培养 细胞培养的特点： 每个细胞的生理特性基本一致； 感染病毒的细胞可通过细胞病变观察结果； 免疫学和核酸技术检测细胞内有无培养病毒； 从感染的组织分离病毒和病毒克隆。 实验报告： 1、常用鸡胚方法有几种，说明各接种途径的日龄。2、叙述鸡胚接种过程中应注意的事项。 3、描述细胞培养和接毒后的细胞病变。 * * *