8第八章原位杂交组织化学论述.ppt

第八章 原位杂交组织化学 一 原位杂交的由来与发展（一）核酸分子杂交技术 按其作用方式大致分为液相杂交和固相杂交两种 液相杂交：参加反应的两条核酸链都游离在溶液中。 液相分子杂交技术包括： ① 吸附杂交 ② 发光液相杂交 ③ 液相夹心杂交 ④ 复性速率液相分子杂交 固相杂交： 是将参加反应的一条核酸链固定在固体的支持物上常用的有硝酸纤维素滤膜，其它如尼龙膜、乳胶颗粒和微孔板等），另一条参加反应的核酸链游离在溶液中。 固相杂交技术包括： ① 菌落原位杂交 ② 斑点杂交法 ③ Southern印迹杂交 ④ Northern印迹杂交 ⑤ 组织原位杂交 （二）原位杂交技术的发展 在近20年飞跃发展的突出特点： ① 由分子遗传学研究提供的探针大量增加； ② 探针生产的可靠性和速率大大发展了； ③ 非放射性标记物的发展使原位杂交技术成为实验室的常规技术和临床日常应用的诊断技术。 ④ 新的非放射性标记技术正在继续不断涌现。 二 原位杂交组织化学基本技术 原位杂交的基本方法和应用原则： ① 杂交前准备，包括固定、取材、玻片和组织的处理，如何增强核酸探针的穿透性、减低背景染色等；