09实验九大肠杆菌感受态细胞的制备及转化论述.ppt

* 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 实验九 实验学时：6 学时 实验类型：综合性 每组人数： 4 人／组 细菌处于0℃，0.1M CaCl2低渗溶液中，使菌细胞膨胀成球形，处于容易吸收外源DNA的状态，该状态称为感受态。 一、实验原理 感受态的本质与存在可能局部原生质体化假说－－感受态细胞的表面形成一种能接受DNA的酶位点， 使DNA分子能进入细胞。 1 感受态细胞的制备 DH5α　菌株 一种常用于质粒克隆的菌株。其 j80lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的b-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1 和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 一 仪器 1．小型高速离心机 2．恒温摇床 3．恒温箱 4．-70℃冰箱 5．恒温水浴器 二、仪器、材料与试剂 二 材料 1．氨苄青霉素 2．大肠杆菌DH5α 3.pBluescriptM13 4．1.5mL 离心管 5 吸头、移液器（枪） 6．试管、培养皿 三 试剂 1．0.1mol/L CaCl2 溶液 2．LB液体培养基 3．氨苄青霉素 Amp ，用无菌水配制成100mg／mL 溶液，置-20℃冰箱保存。 1．从大肠杆菌DH5α 的平板上挑取一个单菌落接于2mL LB液体培养基的试管中，37℃振荡培养过夜。 2