3.邻二氮菲分光光度法测定微量铁方案.pptVIP

Analytical chemistry 吸光光度法 2003年5月 邻二氮菲分光光度法测定微量铁 实验原理 吸光光度法（Absorption Photometry）：基于物质对光的选择性而建立的分析方法。 包括比色法、紫外可见分光光度法、红外分光光度法。 广泛用于无机物和有机物的定性和定量分析。 2、光谱分区 3、物质对光的吸收 1、物质对光选择性吸收的实质 一束光通过某物质时该物质的分子、原子或离子与光子发生碰撞，光子的能量转移至分子、原子或离子上，使这些粒子发生能级变化，由基态跃迁至较高能态，这个过程即为吸收。 光是否被物质吸收，取决于 光子的能量 物质的结构 只有当能级差△E 与光子能量h?相当时物质吸收光。 4、吸收曲线（吸收光谱） 吸收曲线：吸光度随波长变化的曲线。 吸收曲线的特点： 不同的物质因其分析结构不同而具有不同的吸收曲线； 同一物质，浓度不同，其吸收曲线的形状和λmax的位置不变，但在同一波长下吸光度随浓度的增大而增大。 吸收曲线是吸光度法选择测量波长的依据。 朗伯—比耳定律 吸光度A：表征物质对光吸收程度的量。 A= lgIi/It = -lgT =?bc A--吸光度 ?--摩尔吸光系数 C--被测物浓度 Ii--入射光强 工作曲线图 可见分光光度计 1、光源 基本要求： 在仪器工作的波长范围内，提供连续、有足够发射强度和良好稳定性的复合光，而且发射光的强度随波长的变化应尽可能小。 常用光源：钨丝灯和卤钨灯，可使用的波长范围在360 ~2500nm。 2、单色器 单色器作用：从光源发出的复合光中分出所需要的单色光。 单色器组成：由入射狭缝、准光器（透镜或凹面反射镜使入射光成平行光）、色散元件、聚焦元件和出射狭缝等组成。 单色器的核心部分是色散元件（如玻璃棱镜和光栅），起分光的作用。 3、吸收池 4、检测器 分光光度计的使用 分光光度计的保养与维护 安置在干燥、无污染的地方； 仪器停止工作时，必须切断电源，应按开关机顺序关闭主机和稳流稳压电源开关； 比色皿使用完毕后，立即用蒸馏水或有机溶剂冲洗干净，把水渍擦净； 邻二氮菲法测定微量铁 实验步骤及数据处理 1. 配置一系列标准溶液; 2. 测定其中一标准溶液的吸收曲线,找到最大吸收波长; (空白溶液为参比) 3. 在最大吸收波长处,测定一系列标准溶液的吸光度,作标准曲线; (空白溶液为参比) 4.在最大吸收波长处,测定试样的吸光度 5. 根据标准曲线,得到试样中铁含量. 1.分别移取10μg/mL铁标准溶液0.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0 mL 于6个50mL容量瓶中，各加入1 mL 10%盐酸羟胺，摇匀， 经2min后，再加5mL1mol/L NaAc溶液及3mL0.1% 邻二氮 菲，蒸馏水定容。 2.吸收曲线的绘制 用1 cm吸收池，以试剂空白溶液(1号)为参 比，在440～560 nm之间，每隔10 nm测定一次标准溶液(2号) 的吸光度A，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收 曲线，从而选择测定铁的最大吸收波长。 3.标准曲线的绘制 以试剂空白溶液(1号)作参比，1cm比色 皿，在最大吸收波长处，测定标准系列各个吸光度，以铁含 量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 4.吸取5mL试样，其余步骤与3同，测定吸光度。由试样的吸 光度在标准曲线上查出相应的铁含量，然后再换算出试样中 的铁含量（mg/L） * * 能 量 小 200nm 400nm 750nm 大 波 长 光谱区域 紫外光区 可见光区 红外 分析方法 紫外分光光度法 可见分光光度法 50um 红外分光光度法 紫、蓝、青、绿、黄、橙、红 吸 收 曲 线 图 400 500 600 0.100 0.200 0.300 0.400 5、朗伯—比耳定律 布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系。A∝b 1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有类似的关系。A∝ c 二者的结合称为朗伯—比耳定律。 T--透过率 b--液层厚度（光程长度） It--透射光强 标准（工作）曲线 标准（工作）曲线绘制方法：在?、b固定的情况下，测定一系列不同浓度的标准溶液的吸光度，作A~c图，在相同条件下测定样品溶液的吸光度，从曲线上可查出被测样品的浓度。 浓度（c） 吸光度 光 源 吸收池 检测器 单色器 数据处理系统 一、可见光分光光度法 一、仪器结构框图 吸收池用于盛放分析试样； 可见光区只能用玻璃吸收池； 吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向； 吸